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目的:采用原核表达系统表达和纯化重组谷氨酰胺:6-磷酸果糖酰胺基转移酶(GFAT),制备GFAT多克隆抗体,并用以研究在糖尿病发生发展过程中GFAT的表达情况。方法:通过生物信息学分析其抗原性和属间同源性,选择需要的基因区域;利用RT-PCR扩增小鼠肝脏cDNA中GFAT基因片段,克隆到表达载体pET28b中;在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化重组GFAT;用纯化的重组GFAT免疫BALB/c小鼠后得到多克隆抗体;用Western印迹检测正常小鼠、高血糖小鼠及胰岛