目的:检测半夏曲炮制过程中细菌、酵母菌、霉菌的菌落数量并定量分析其中4种优势微生物数量的动态变化,为研究半夏曲炮制机制提供实验依据。方法:参照《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》（第十册）制备半夏曲,取半夏曲炮制过程中0,30,60,90,120 h共5个不同时间点样品,分别用选择性培养基进行细菌、霉菌、酵母菌的培养和分离纯化,并进行菌落计数;应用荧光定量聚合酶链式反应（PCR）技术对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,宛氏拟青霉Paecilomyces variotii,丝衣霉菌Byssochlamys spectabilis,黑曲霉Aspergillus niger进行绝对定量,分别以枯草芽孢杆菌、宛氏拟青霉、丝衣霉菌、黑曲霉重组质粒为标准品,经倍比稀释后制作标准曲线,对半夏曲炮制至5个不同时间点（0,30,60,90,120 h）样品中的4种微生物进行定量分析。结果:半夏曲炮制过程中细菌数量少且变化平缓,而酵母菌和霉菌数量至发酵后期时迅速增加,至发酵结束时均>1×10⁶ CFU·mL^-1。枯草芽孢杆菌5个不同时间点样品中的拷贝数分别为3.53×10⁵,7.56×10⁴,1.58×10⁵,1.90×10⁶,1.85×10⁶ copies·g^-1;宛氏拟青霉的拷贝数为0,0,0,3.45×10⁷,4.15×10⁸copies·g^-1;丝衣霉菌的拷贝数为0,0,0,1.04×10⁸,2.28×10⁸ copies·g^-1;黑曲霉的拷贝数为0,0,9.48×10⁵,1.47×10⁶,7.56×10⁶ copies·g^-1。结论:半夏曲炮制过程中微生物菌群变化趋势可以用4种优势微生物的动态变化来反映,霉菌在半夏曲炮制中可能起重要作用。荧光定量PCR技术具有快速灵敏、重复性好和特异性高的优点,适用于半夏曲的炮制机制研究。