从四川省爆发猪传染性胸膜肺炎的某猪场病猪中,分离到了一株细菌。通过形态学,血清学,分子生物学试验,鉴定为猪胸膜肺炎放线杆菌1型,命名为APP-CYY。药敏试验结果:对四环素、头孢三嗪、氟哌酸、复方新诺明、丙氟哌酸敏感;对卡那霉素、丁氨卡那、先锋霉素Ⅳ、万古霉素、氨苄青霉素、庆大霉素耐药。PCR鉴定根据国外报道,猪胸膜肺炎放线杆菌高度保守的弱溶血毒素APXⅣA基因序列,设计的引物,扩增到了预期大小442bp的核苷酸片段。根据已发表的猪传染性胸膜肺炎血清1型ApxⅠA(NCBI登陆号:X68595)和TbpB(NCBI登陆号:U16019)基因序列设计合成特异性引物,以分离APP-CYY菌株基因组DNA为模板,分别扩增出了预期约3089bp和736bp的目的片段,然后分别连接到pMD18-T载体中,构建了重组质粒pMD18-T-ApxⅠA和pMD18-T-TbpB,重组质粒经酶切鉴定和序列分析表明为ApxⅠA和TbpB基因。该基因包括猪ApxⅠA和TbpB基因全部开放阅读框,将所获得的猪传染性胸膜肺炎血清1型ApxⅠA基因序列,同Genbank上有报道性胸膜肺炎放线杆菌血清1、5、9、10型ApxⅠA基因之间进行同源性比较,同源性在96.8-98.8%之间。测定的TbpB基因序列,仅与GenBank数据库中的两条猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清1型TbpB基因序列具有较高的同源性,分别为99.7%和99.6%。运用鉴定正确的重组质粒pMD18-T-ApxⅠA和pMD18-T-TbpB,酶切回收了ApxⅠA和TbpB基因片段,并分别插入原核表达载体pET32a(+),构建原核表达质粒pET32a(+)-ApxⅠA和pET32a(+)-TbpB。在大肠杆菌BL21中进行诱导,分别表达了ApxⅠA(125 Kd)和TbpB(44 Kd)的蛋白,经鉴定此蛋白与预期的胸膜肺炎放线杆菌的ApxⅠA和TbpB大小相同。Western blotting分析显示均可与胸膜肺炎放线杆菌阳性血清1型发生反应。