胶体金免疫层析技术检测犬细小病毒抗体方法的建立

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本研究运用胶体金免疫层析技术,建立一种快速、灵敏、特异的检测犬细小病毒抗体的方法。本实验用对犬细小病毒敏感的F81细胞系从疑似犬细小病毒感染犬的粪便中分离病毒,并免疫犬获得犬细小病毒阳性血清;采集健康犬的血清,采用硫酸铵盐析和葡聚糖G-200柱层析法纯化获得犬的IgG,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测其达较高纯度;以制各的犬IgG纯品常规免疫健康家兔,双向琼脂扩散试验检测抗体效价达1∶64以上后收集兔血清,辛酸-硫酸铵盐析法提纯兔IgG,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其达较高纯度。柠檬酸三钠还原法制备直径20nm的胶体金颗粒,胶体金标记兔抗犬IgG,最佳标记量和最适pH值的测定结果分别为10μg/ml和9.0,低温超速离心法纯化标记好的金标二抗;纯化后的胶体金标记抗体作1∶2稀释,吸附于玻璃纤维。犬细小病毒抗原在硝酸纤维素膜上划线作为检测线,最适划线浓度为0.8mg/ml;羊抗兔IgG在硝酸纤维素膜上划线作为对照线,最适划线浓度为0.75mg/ml。试纸条检测犬细小病毒抗体,10min左右显示结果,当HI效价高于1∶80时,胶体金免疫层析检测与HI试验的符合率为100%,说明胶体金免疫层析技术可替代HI试验用于犬细小病毒免疫保护效果的监测。胶体金免疫层析法检测犬细小病毒抗体操作简便,需时短,为临床监测犬细小病毒抗体效价提供了实用工具。
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