目的：每年全世界约有120万患者被确诊为肺癌，而且肺癌的发病率和死亡率呈逐年上升趋势，其预后很差，发生淋巴结转移较早、临床较常见。由于肺癌早期症状隐秘，多数患者被确诊时已发生转移。侵袭和转移是影响肺癌患者预后的重要原因之一，探究淋巴转移相关细胞因子及探寻抑制淋巴转移的药物是遏制肺癌发展及改善患者预后的重要方法。随着分子生物学不断的发展，人们对肺癌的浸润和转移机制及其特异因子表达的研究亦在不断深入。EGFR(epidermal growth factor receptor)表皮生长因子受体是ErbB受体家族的重要成员，其在多种肿瘤组织呈过度表达，尤其在已发生淋巴转移的肿瘤中表达上调。朱丛中[1]等应用组织芯片技术与免疫组织化学法检测发现EGFR与环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在肺癌组织中的表达呈正相关，二者均与肺癌的淋巴转移密切相关，COX-2和EGFR的激活与调节均与丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）和磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol3-kinase, PI3K）等信号通路相关，两者之间存在直接或间接的相互活化关系。C-erbB-2(HER-2、Neu)作为表皮细胞生长因子家族中的重要成员之一，是原癌基因的编码产物。HER-2大多通过癌基因的扩增和过表达激活,进一步通过一定的信号转导通路最终调控细胞的增殖、分化、迁移、黏附、存活、凋亡,加快细胞增殖、加速细胞周期来增强恶化,同时会抑制恶性细胞凋亡并对多数化疗药产生耐药。趋化因子受体4（CXCR4）属CXC受体亚家族，是趋化性细胞因子CXCL12即基质衍生因子-1(SDF-1)的专属受体。在其趋化因子特异性受体介导作用下，构成CXC-L12/CXCR4生物轴，形成一个与细胞间信息传递、细胞迁移等有密切关系的偶联分子对。近年研究发现, SDF-1/CXCR4轴在肿瘤细胞迁移、侵袭和转移过程中起着重要的作用[2-3]β-连环素（β-catenin）是上皮钙黏素-连环素复合体(E-cadherin/catenin)和Wnt信号传导通路的关键分子,β-连环素的异常蓄积,引起细胞增殖或肿瘤发生，与肺癌的淋巴转移密切相关。吲哚美辛(Indomethacin,In)为非甾体类抗炎药（NSAIDs）之一，其对肺癌移植瘤的抑制作用及其机制国内外文献报道不多，但近年联合应用COX-2抑制剂是否可增强化疗药物的细胞毒性作用和抗淋巴生成效应的研究逐渐增加。奥沙利铂(oxaliplatin)是第三代铂类广谱抗癌药，通过产生烷化结合物作用于DNA，形成链内和链间交联，从而抑制DNA的合成及复制。本实验旨在研究吲哚美辛联合奥沙利铂抗人肺癌裸鼠移植瘤的作用及EGFR、β-catenin、C-erbB-2、CXCR4表达的影响，以探讨肺癌侵袭转移机制，为治疗肺癌寻求新的靶点。方法：选25只4～5周龄BALB/c雄性裸小鼠，体重20～24克，在IVC无菌饲料及灭菌纯净水饲养，饲养环境无特定病原体，环境温度、湿度适宜。使用含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的F12k培养基，在37℃含5%CO2培养箱中培养，观察细胞贴壁生长到70%～80%融合时，用0.25%胰蛋白酶进行消化并传代。将处于对数生长期的A549细胞,先用PBS洗涤后，再用0.25%胰蛋白酶消化，制成单细胞悬液，收集于离心管，以离心机1000rpm平衡离心5分钟，弃去上清液。用F12k（不含血清）培养基稀释,用血细胞计数板对A549细胞进行计数,细胞计数完毕,密度为1×10~7/ml。裸鼠皮肤消毒后，以1ml注射器分别在每只裸鼠左腋部皮下接种已制成的细胞悬液0.2ml。建立肺癌裸鼠移植瘤模型。其中25只裸鼠成瘤，用游标卡尺测量肿瘤体积的长径(a)、短径(b)，按照公式V=ab2/2，估算肿瘤近似体积。待移植瘤平均直径约4mm后，去掉肿瘤体积最小的裸鼠，将剩余裸鼠随机分为对照组、吲哚美辛组(2.5mg/kg/d)、奥沙利铂组、奥沙利铂和吲哚美辛联合用药组，每组6只。奥沙利铂甘露醇注射液采用腹腔注射给药,剂量为10mg/kg/次,每周给药2次;吲哚美辛组采用灌胃给药,剂量为2.5mg/kg,每天给药1次。对照组腹腔注射等量生理盐水,口服灭菌蒸馏水。给药42天后,断颈处死裸鼠,取肿瘤组织，免疫组织化学法检测肿瘤组织中EGFR、C-erbB-2、CXCR4、β-catenin蛋白的表达，以北航真彩色病理图像分析系统计算平均积分光密度值。荧光实时定量PCR法检测肿瘤组织中EGFR、C-erbB-2、CXCR4、β-cateninmRNA的表达。结果：25只裸鼠接种肺癌A549细胞，全部成瘤，肺癌细接种后第10天，肿瘤结节直径平均约4mm。以图像分析系统对EGFR、C-erbB-2、CXCR4、β-catenin蛋白免疫组织化学染色切片进行平均积分光密度测定，单因素方差分析得出结果，吲哚美辛组及联合组EGFR、β-catenin、C-erbB-2、CXCR4蛋白表达水平均较对照组明显降低(分别P<0.05),且联合组表达低于吲哚美辛组(分别P<0.05)；与对照组相比，奥沙利铂组EGFR、C-erbB-2、CXCR4、β-catenin表达水平无明显区别（P>0.05）。实时荧光定量PCR法测定EGFR、C-erbB-2、CXCR4、β-cateninmRNA，单因素方差分析得出结果，吲哚美辛组及联合组EGFR、C-erbB-2、CXCR4、β-catenin mRNA表达水平均较对照组明显降低(分别P<0.05),同时联合组表达低于吲哚美辛组（P<0.05）；与对照组相比，奥沙利铂组EGFR、C-erbB-2、CXCR4、β-catenin表达水平无明显区别（P>0.05）。结论：1吲哚美辛能使肺癌裸鼠移植瘤EGFR、C-erbB-2、CXCR4、β-catenin蛋白，及EGFR、C-erbB-2、CXCR4、β-catenin mRNA的表达显著减少。说明吲哚美辛能通过基因和蛋白水平抑制肺癌相关因子EGFR、C-erbB-2、CXCR4、β-catenin的表达，从而抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长和侵袭。2吲哚美辛同奥沙利铂联合用药比单药抑制人肺癌裸鼠移植瘤EGFR、C-erbB-2、CXCR4、β-catenin的表达更明显。表明吲哚美辛可能对抗了奥沙利铂所引起的耐药，两种药联合应用起到协同作用，提高了抗肿瘤及抗淋巴转移疗效。