四种钛表面对成骨细胞生长的影响

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[目的]研究喷砂表面、微弧氧化表面、仿生法表面、碱热表面对成骨细胞形态、增殖及细胞骨架的影响。[材料和方法]将直径为15mm,厚度1mm的纯钛钛片根据表面处理方法不同分为12组:机械打磨组(grooved, G)、喷砂组(sandblasted, SB)、碱热1-4组(alkali heat, AH)、仿生法1-4组(SBF)、打磨微弧氧化组(grooved microarc oxidation, GMAO)和喷砂微弧氧化组(sandblasted microarc oxidation, SBMAO)。采用扫描电镜、X射线衍射仪、能谱分析检测钛片表面理化性质。采用扫描电镜(SEM)、激光共聚焦显微镜(Laser scanning confocal microscope, LSCM)观察研究钛片表面成骨细胞生长情况及细胞骨架的改变,并采用MTT法、大鼠骨钙素(BGP)ELISA检测法对各组钛片表面对成骨细胞增殖、功能变化进行研究。[结果]1.钛片在机械打磨和喷砂的基础上经碱热法,仿生法及微弧氧化法处理后,碱热组出现了纳米级均匀立体网状结构,仿生法组表面沉积了羟基磷灰石颗粒,微弧氧化组呈现出火山口状层叠的孔洞。2.本研究采用改进后的贴壁组织块分步消化法分离培养的成骨细胞符合成骨细胞的特征,具有成骨细胞的多种生物学特征,并且具有较高的纯度。3.各种钛表面成骨细胞增值测定,喷砂微弧氧化组各时间点OD值均高于其他组。骨钙素检测,14d时微弧氧化两组均高于其余各组,喷砂微弧氧化组高于打磨微弧氧化组。4.成骨细胞接种12小时后,各组肌动蛋白纤维清晰可见,纤维束平行排列与细胞长轴一致;打磨组肌动蛋白纤维沿划痕方向排列;喷砂组肌动蛋白纤维沿孔洞边缘排列,细胞覆盖在孔洞上方;仿生法1-4组肌动蛋白纤维依据附着点排列,包绕表面羟基磷灰石颗粒;碱热1-4组细胞肌动蛋白纤维沿表面排列,细胞边缘处有微丝伸入孔洞中;MAO组细胞肌动蛋白纤维平行排列,圈形排列的肌动蛋白纤维减少,肌动蛋白纤维在细胞边缘出汇聚成束,伸向孔洞内。[结论]1.改进后的贴壁组织块分步消化法可用有限的SD大鼠获得更多的、来源稳定的具有典型成骨细胞生物学特性的成骨细胞。2.不同目数喷砂颗粒造成的粗糙表面对碱热法、仿生法、微弧氧化法制备表面有一定的影响。3.微弧氧化表面形貌对成骨细胞增殖、功能的促进作用强于其余各组。4.激光共聚焦显微镜观察发现,成骨细胞肌动蛋白纤维的铺展与钛片表面形貌有关。
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