论文部分内容阅读
目的：分析bFGF和BMP-2基因单独和联合转染对体外培养的羊BMSCs的增殖和骨向分化的影响,比较Collagen-I、OC、OPN等成骨相关基因于转染前后相对表达量的差别,为构建组织工程骨的种子细胞做理论依据。方法：全骨髓培养法培养羊BMSCs,构建bFGF、BMP-2慢病毒载体,分别转染羊BMSCs,流式细胞仪检测转染率,将得到bFGF组、BMP-2组、联合组,对照组细胞,提取RNA后使用实时定量PCR和Western-blot检测Collagen-I、OC、OPN等成骨相关基因的mRNA水平和蛋白水平相对表达量的变化。结果：(1)慢病毒载体转染的BMSCs的转染率达95.4%,且bFGF和BMP-2均稳定表达。(2)mRNA水平上,在Collagen-I和OC基因,bFGF主效应、BMP-2主效应、交互效应均有统计学意义(P<0.05)。bFGF和BMP-2均能促进BMSCs的两基因高表达,且bFGF与BMP-2间存在协同作用。联合基因转染时Collagen-I和OC基因表达高于单一基因转染。但在OPN基因,bFGF主效应无统计学意义(P>0.05)。多元析因显示,bFGF和BMP-2两因子均能增高成骨相关基因mRNA表达且存在协同的交互作用(P<0.05)。(3)蛋白水平上,在Collagen-I、OC和OPN蛋白,bFGF主效应、BMP-2主效应、交互效应均有统计学意义(P<0.05)。bFGF和BMP-2均能促进BMSCs的三个成骨相关基因蛋白高表达,且bFGF与BMP-2间分别存在协同作用。联合基因转染时Collagen-I和OC蛋白表达高于单一基因转染。多元析因显示,bFGF和BMP-2两因子均能增高成骨相关蛋白表达且存在协同的交互作用(P<0.05)。结论：体外实验显示bFGF和BMP-2在成骨相关基因的表达上具有协同的交互作用,且联合转染组中的Collagen-I、OC、OPN等成骨相关基因mRNA水平和蛋白水平相对表达量均最高,该组细胞的成骨功能最强,适合作为组织工程骨的种子细胞。