论文部分内容阅读
N6-甲基腺苷(m6A),作为最常见的RNA甲基化修饰,参与细胞分化、配子发生等。关于m6A在动物附植前胚胎发育期间的表达与功能也未见报道。本研究旨在揭示m6A在猪早期胚胎发育期间的动态表达变化与作用,为丰富对m6A生物学功能的理解提供依据。取得的主要结果如下:(1)对各期胚胎进行m6A免疫荧光染色。发现m6A修饰整体呈现一种先下降后上升的趋势,且囊胚期修饰水平最高。(2)对m6A修饰酶编码基因进行序列分析,发现pMETTL3、pMETTL14、pWTAP位于第7号、8号、6号染色体,全长为18.8 kb、34.31 kb、26.78 kb;pFTO、pALKBH5位于第6号、8号染色体,全长为410.34 kb、22.79 kb。以上基因在核苷酸、氨基酸序列上与人和大鼠均有很高的同源性。(3)q-PCR检测m6A修饰酶编码基因在各期胚胎中的表达,发现METTL3、FTO在1-cell表达量最高;METTL14、WTAP、ALKBH5在2-cell表达量最高。(4)在MII期卵母细胞中注射pMETTL3的siRNA,发现干扰组Day5,Day6,Day7孤雌囊胚率显著下降(21.17±5.10%vs 9.12±2.28%,56.80±5.61%vs 26.38±4.72%,59.90±5.32%vs 34.47±6.15%)。(5)在胚胎体外培养液PZM3中添加环亮氨酸,发现实验组囊胚率显著降低(P<0.05)。综上所述,本研究首次揭示了猪附植前胚胎发育过程中m6A修饰模式,证明m6A修饰是猪附植前胚胎发育是所必需的,为进一步的如机制等的研究提供理论基础。