Wnt3a蛋白对小鼠胚胎干细胞多能性维持以及诱导多能干细胞重编程效率的影响

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Wnt信号通路在调控胚胎分化与干细胞多能性维持等生物学过程中发挥重要作用。该信号通路通过胞外蛋白与细胞表面受体的结合起始一系列复杂的胞内信号,从而调控相关基因的表达。Wnt信号通路控制着许多与多能性维持相关基因的表达,对于干细胞多能性的维持与体细胞诱导重编程具有有一定的促进作用。然而,Wnt信号通路在维持和诱导干细胞多能性时对于表观遗传修饰基因的调控作用目前还不清楚。本研究旨在以小鼠胚胎干细胞(ESCs)和诱导多能干细胞(iPSCs)为研究对象,利用L-Wnt3a细胞向胞外分泌Wnt3a蛋白这一功能,通过制备其饲养层或条件培养液,进行ESCs培养或iPSCs诱导,系统探讨Wnt3a信号通路对于胚胎干细胞多能性维持,诱导干细胞多能性的获得,以及相关表观遗传修饰基因的表达调控作用。  结果显示,使用L-Wnt3a细胞饲养层培养ESCs可以很好的维持ESCs的形态,该ESCs表达碱性磷酸酶等多能性相关基因,能够在体外分化形成类胚体和畸胎瘤。进一步检测表观遗传修饰和Wnt3a信号通路相关基因的表达显示,组蛋白H3K36me2的甲基转移酶kdm2b的转录水平显著提高,H3K9me甲基转移酶suv39h1的转录水平显著下降。此外,DNA羟甲基化酶tet1的表达水平显著下调,chd1与parp1的转录无显著变化。Wnt3a信号通路调控基因cd31与Wnt通路抑制基因dkk1的表达显著上调,stat3的表达显著下降,而birc5转录水平无明显变化。  当在无饲养层条件培养ESCs时,L-Wnt3a细胞条件培养液可显著维持ESCs的克隆形态,而传统干细胞培养液中培养的ESCs克隆发生明显分化。L-Wnt3a细胞条件培养液培养的ESCs的多能性基因sox2、oct4、nanog以及表观修饰基因parp1、kdm2b的转录水平都显著高于对照组ESCs培养液培养的ESCs。而这两组细胞的Wnt信号通路基因的表达则没有出现显著改变,相比分化较严重的MEF培养液培养的ESCs,两组细胞cd31和birc5的转录水平相对较高。此外,L-Wnt3a细胞条件培养液培养的ESCs能够较好的维持干细胞的多能性,体外分化形成的类胚体表达更高水平的三胚层标记基因,并体内分化形成畸胎瘤。  本研究显示,Wnt3a信号通路会显著促进ESCs多能性的维持并上调与ESCs多能性维持相关的表观遗传修饰基因的表达。进而,该信号通路显著促进小鼠iPSCs的诱导,并显著上调与多能性调控相关的表观遗传修饰基因的表达。本实验证实,Wnt3a信号通路不但对多能性基因转录有显著的调控作用,而且也影响与多能性相关的表观遗传调控基因的表达。该研究的结论为进一步阐明Wnt3a信号通路在调控多能性,特别是诱导过程中多能性的获得奠定理论基础。
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