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猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种猪繁殖障碍和呼吸道症状的传染病,对养猪业造成极大危害,控制直至消灭这种传染病是生产上急需解决的问题,控制本病的关键在于生产高效的疫苗,但由于PRRSV变异很大,给高效疫苗的开发造成很大困难。本课题旨在从广西本地猪场分离毒株,通过与已发表毒株的对比核苷酸和氨基酸序列,了解广西PRRS的流行特点。并且以本地分离株为基础,克隆表达其诱导机体产生中和抗体的E基因,构建成熟的原核表达系统,为今后基因工程疫苗的生产打下基础。本实验从广西以及邻近省市收集大量疑似病料,进行RT-PCR的检测,获得阳性材料后;使用肺泡巨噬细胞(PAM)和非洲绿猴肾细胞的衍生细胞系MARC-145细胞进行病毒的分离;对其E基因进行克隆测序,并与发表毒株进行比较;随后,构建E基因的原核表达系统,并进行诱导表达。实验期间,共收集了79份疑似病料,全部进行RT-PCR检测,累计获得42份阳性病料。将所有阳性病料处理后,接种PAM和MARC-145两种细胞,分离到GD株。对其E基因克隆测序后,通过与已发表毒株的比较,发现GD株与美洲株的亲缘关系较近,而与欧洲株关系较远。设计了另外一对特异性引物对其E基因进行扩增,并亚克隆进PET-30a,PET-32a载体,经过酶切鉴定,证明成功构建E基因的重组质粒。将重组质粒转化BL-21(DE3),进行诱导,成功表达了PRRSV的gp5蛋白,