农杆菌介导的大白菜遗传转化体系的建立

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:hiwola
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大白菜(Brassicarapa L.ssp.Pekinensis)原产自中国,是中国乃至亚洲重要蔬菜作物。稳定的遗传转化体系将为大白菜分子育种及基因功能验证奠定基础。本研究对大白菜自交系’GT-24’的再生体系进行优化。在此基础上,成功建立农杆菌介导的大白菜’GT-24’的遗传转化体系,并获得了转化植株。结果如下:1.以大白菜’GT-24’为材料,探讨外植体类型、蔗糖、6-BA、AgO3添加浓度对不定芽分化的影响,对’GT-24’离体再生体系进行优化。结果表明:最佳外植体为子叶-子叶柄;最佳芽诱导培养基为 MS+0.5mg/L NAA+5mg/L 6-BA+4mg/L AgN03+7g/L 琼脂+30g/L蔗糖(pH=5.8),不定芽平分化率可达93.5%,较原再生体系提高了 7.28%。2.利用农杆菌介导法,通过对筛选抗生素潮霉素和抑菌抗生素特美汀的适宜浓度、及外植体最佳预培养时间的筛选,建立起遗传化体系。’GT-24’遗传转化过程中,外植体无需预培养,农杆菌菌液OD600值为0.5,侵染时间为15 min,避光共培养2d,抗性芽筛选培养基为 MS+0.5mg/L NAA+5mg/L 6-BA+4mg/L AgN03 +200mg/L TMT+25mg/L Hyg +7g/L琼脂+30g/L蔗糖(pH=5.8)。转基因植株的生根诱导培养基中需添加1 mg/L NAA或者1 mg/L IBA。对抗性植株进行PCR、RT-PCR检测及GUS组织化学染色鉴定,证实获得转基因植株,经重复性试验,平均转化率为2.49%。
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