附红细胞体(简称附红体)属于条件致病微生物。人感染附红体的比例正逐年增加,附红体对人体的危害逐渐引起医学界的关注。目前实验室中对附红体的检测有直接镜检,染色镜检以及PCR法等。本课题通过对血液病患者附红体感染情况的调查、采取多种方法联合检测附红体以及尝试对人附红体的体外培养等对附红体进行了研究:1.利用吖啶橙荧光染色法调查血液病患者附红体感染情况,为血液病患者的感染控制提供依据。选取体检健康人50例,血液病患者223例,用吖啶橙荧光染色法检测附红体。结果发现,体检人群和血液病患者附红体感染率分别为12.00%和28.25%,血液病组感染率明显高于体检组(?2=5.711,P<0.05);男女性别之间,各年龄段之间以及血液科门诊患者和住院患者之间的附红体感染均无明显差异;血液病组中淋巴瘤患者感染率最高,和其他血液疾病患者附红体感染率的差异有统计学意义。结果表明,血液病患者尤其是淋巴瘤患者易感染附红体,需在治疗时予以关注。2.分别用瑞氏-吉姆萨染色法和吖啶橙荧光染色法对223例血液病患者进行附红体检测,结果显示,瑞氏-吉姆萨染色法附红体检出率为46.19%,吖啶橙荧光染色法为28.25%。对两种方法均为阳性的40例标本进行PCR检测,选取其中1例阳性结果进行测序并分析,发现该序列与GenBank中猪附红体序列相似性为97%。结果表明,瑞氏-吉姆萨染色法和(或)吖啶橙荧光染色法可用于附红体感染的筛检,两种方法均为阳性时结合PCR检测可提高附红体检测特异性。3.将RPMI-1640培养基和胎牛血清按一定比例混合,添加葡萄糖等作为基础培养基,以正常人红细胞泥作为载体,接种人附红体感染的红细胞进行体外增殖培养。提取培养物基因组DNA,进行PCR检测分析。结果观察到附红体在培养24h时出现增殖高峰,感染率达80%左右。PCR检测结果与患者原始血样提取的附红体基因组序列一致。本研究进一步分析比较了附红体的实验室检测体系,初步建立了人附红体体外培养技术,为今后进一步研究人附红体病提供了理论依据和实验基础。