【摘 要】
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白藜芦醇是广泛存在于葡萄、花生和虎杖等植物中的一种多酚类化合物,具有良好的抗氧化、调节免疫、抗肿瘤、抗炎和保护心血管等多种生理功效,被广泛应用于保健食品、医药品等
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白藜芦醇是广泛存在于葡萄、花生和虎杖等植物中的一种多酚类化合物,具有良好的抗氧化、调节免疫、抗肿瘤、抗炎和保护心血管等多种生理功效,被广泛应用于保健食品、医药品等领域中。但是,白藜芦醇存在着水溶性低、稳定性差等缺点,同时由于其在肠道和肝脏被迅速代谢排泄,其生物利用度很低,严重影响了生理活性的发挥。本论文从马鲛鱼(Scomberomorus niphonius)酶解制备得到马鲛鱼肽,可明显提高白藜芦醇的消化稳定性和生物利用度,从而明显提高其生理活性。对马鲛鱼酶解工艺进行优化,考察了不同蛋白酶、料液比、加酶量、酶解时间、酶解p H值对酶解效果的影响,确定最优工艺为:碱性蛋白酶、料液比为1:10、加酶量为3000 U/g、酶解时间为4 h、酶解p H值为8、酶解温度为50℃,其蛋白质回收率为67.6±1.8%,水解度为22.5±2.9%。研究对比马鲛鱼酶解物(SH)、白藜芦醇以及马鲛鱼酶解物-白藜芦醇复合物(SH-R)对B16细胞的抑制作用,结果发现在经过模拟胃肠消化后,SH对B16细胞无毒害作用,在37℃、酚/肽比例为1:10时,SH可使白藜芦醇对B16细胞的抑制率提升14.3%(P<0.05)。采用荧光光谱法对SH和白藜芦醇之间的交互反应进行了表征,发现白藜芦醇可引起SH明显的荧光猝灭,其中动态猝灭和静态猝灭两种方式可能同时存在。在37℃下白藜芦醇与SH的结合位点数为0.935,二者之间主要表现为疏水作用。以复合物对B16细胞的抑制率为指标,进一步对SH进行分离纯化。首先,以DEAE-纤维素52为填料,采用阴离子交换色谱法对SH进行了分离纯化,得到组分SHa。再以葡聚糖凝胶Sephadex G-15为填料,经尺寸排阻色谱法分离纯化,得到组分SHa1。复合物SHa1-R(37℃、酚/肽比例1:10)可使白藜芦醇对B16细胞的抑制率提升21.7%。分析显示,SHa1可以显著提高白藜芦醇的溶解度和消化稳定性。采用非翻转大鼠肠囊模型,分析SHa1对白藜芦醇肠吸收率的影响,发现SHa1使白藜芦醇在十二指肠和空肠处的肠吸收率分别提高16.5%和9.5%。说明,SHa1可能通过提高白藜芦醇的消化稳定性和生物利用度,而使其抑制B16细胞的作用得到明显改善。对SHa1提高白藜芦醇的消化稳定性和生物利用度的作用机制进行初步探讨。采用高效液相色谱法对SHa1的分子量分布进行测定,发现1000 Da以下的小分子占SHa1的87%以上,其中317-623 Da的物质占SHa1的60%以上。采用高速氨基酸分析仪对SHa1的氨基酸组成和含量进行测定,发现其含有丰富的天冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸。采用超高液相色谱-电喷雾电离串联质谱联用法对SHa1进行序列鉴定,共鉴定出5条多肽:TLR、LQLE、LDDL、LNLT、ALDLH。SHa1通过与白藜芦醇发生交互作用,而可能对白藜芦醇的消化吸收特性、生物利用度和生理活性发生显著影响。
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