肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)能够选择性地诱导多种肿瘤细胞凋亡,而对正常组织细胞基本没有毒性,因此成为肿瘤治疗中的研究热点。TRAIL一旦正式投入使用后,必然需要进行大规模生产。目前已报道的TRAIL主要以包涵体形式表达。然而包涵体表达的蛋白需复性后才能得到功能蛋白,且包涵体的复性通常效率低、过程复杂,这在一定程度上影响了TRAIL的大规模生产。因此,减少包涵体的形成和提高重组蛋白的可溶性表达,将会推动TRAIL的产业化发展。 本实验通过PCR技术扩增出人可溶性TRAIL114-281氨基酸残基的cDNA序列,扩增产物克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a,并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现高表达。将表达的目的蛋白经Western Blot实验显示具有明显抗原性。 然后采用响应面法对TRAIL的可溶性表达条件进行优化,优化后,TRAIL的可溶性表达量从146.84 mg/L提高到454.85 mg/L,提高了3.1倍。在该基础上进行了高密度发酵实验,进一步提高TRAIL的可溶性表达量至3.66g/L。 将发酵得到的菌液直接取破壁上清进行纯化,通过亲和层析和离子交换层析两步纯化得到目的蛋白。目的蛋白纯化后最终产量为1.04 g/L。最后对纯化后的可溶性TRAIL蛋白进行了性质鉴定,结果表明纯化后的目的蛋白纯度高,分子量与理论值相符,活性高。