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目的:前期研究中发现,circFIP1L1-miR-1253-SFN信号轴在鼻咽癌(NPC)放疗中起着重要作用,本课题拟研究circFIP1L1-miR-1253-SFN信号轴通路在NPC转移及上皮间质转化(EMT)中的具体作用机制,为临床鼻咽癌转移治疗研究提供有效的靶点。方法:(1)收集鼻咽癌患者和正常人血清,qRT-PCR检测血清中circFIP1L1和miR-1253的表达水平;(2)qRT-PCR检测鼻咽部永生化上皮细胞NP69、NPC细胞株5-8F及6-10B中circFIP1L1、miR-1253、SFN的表达水平;(3)构建circFIP1L1、circFIP1L1 NC载体转染鼻咽癌细胞株5-8F及6-10B,qRT-PCR检测circFIP1L1、miR-1253、SFN表达水平;(4)NPC细胞株5-8F、6-10B瞬时转染miR-1253-mimic,miR-1253-inhibitor及其空载体组,经qRT-PCR检测circFIP1L1、SFN表达水平;(5)NPC细胞6-10B瞬时转染miR-1253-mimic,miR-1253-inhibitor,Western blot实验检测14-3-3σ及EMT相关蛋白E-cadherin,N-cadherin,Vimentin的表达情况;(6)NPC细胞株5-8F、6-10B共同转染circFIP1L1,circFIP1L1+miR-1253 mimic,circFIP1L1-NC,经qRT-PCR检测SFN表达情况,同时进行Western Blot实验检测14-3-3σ及EMT相关蛋白E-cadherin,N-cadherin,Vimentin表达情况;(7)NPC细胞株5-8F,6-10B瞬时转染circFIP1L1、circFIP1L1NC进行划痕愈合及Transwell迁移、侵袭实验,探究NPC细胞侵袭转移能力;(8)NPC细胞株5-8F,6-10B分别瞬时转染miR-1253-mimc、miR-1253 inhibitor及其空载体进行划痕愈合及Transwell迁移侵袭实验,探究NPC细胞迁移和侵袭能力;(9)NPC细胞株5-8F,6-10B分别瞬时转染circFIP1L1-NC,circFIP1L1、circFIP1L1+miR-1253mimic,进行划痕愈合及Transwell迁移、侵袭实验,探究NPC细胞迁移和侵袭能力;(10)动物体内实验探究circFIP1L1对鼻咽癌体内成瘤的影响:在裸鼠皮下注射鼻咽癌5-8F细胞形成肿瘤;观察circFIP1L1组、circFIP1L1-NC组、生理盐水组三组鼻咽癌移植瘤生长情况,比较每组形成鼻咽癌肿瘤大小,探究circFIP1L1对NPC体内成瘤的影响。结果:(1)正常人血清中circFIP1L1表达水平与NPC患者相比上升(P<0.05),而miR-1253表达水平与NPC患者相比下降(P<0.05);(2)NPC细胞5-8F、6-10B,与鼻咽部永生化上皮细胞NP69组相比,circFIP1L1、SFN表达水平下降,而miR-1253表达水平上升(P<0.05);(3)5-8F、6-10B转染circFIP1L1后,qPCR结果显示过表达circFIP1L1组miR-1253表达水平下降,SFN表达水平上升(P<0.05);(4)转染miR-1253 mimic及miR-1253 inhibitor后,qPCR结果显示与对照组相比,miR-1253 mimic组SFN表达水平下降,而miR-1253 inhibitor组SFN表达水平上升(P<0.05),circFIP1L1表达水平变化无统计学意义(P>0.05);(5)Western blot结果显示,miR-1253 mimic组与对照组相比,E-cadherin、14-3-3σ蛋白表达水平下降(P<0.05);N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平上升(P<0.05);miR-1253 inhibitor组与对照组相比,E-cadherin、14-3-3σ蛋白表达水平上升(P<0.05);N-cadherin,Vimentin蛋白表达水平下降(P<0.05);(6)circFIP1L1组与circFIP1L1+miR-1253mimic组、circFIP1L1 NC组比,14-3-3σ、E-cadherin蛋白表达水平上升,而N-cadherin,Vimentin蛋白表达水平下降(P<0.05);circFIP1L1+miR-1253 mimic组与circFIP1L1组相比14-3-3σ、E-cadherin蛋白表达水平下降,而N-cadherin,Vimentin蛋白表达水平上升(P<0.05);其中,circFIP1L1+miR-1253 mimic组与circFIP1L1-NC组相比14-3-3σ、E-cadherin、N-cadherin,Vimentin蛋白表达水平变化无明显差异(P>0.05);(7)细胞划痕愈合实验及Transwell迁移侵袭实验结果显示,circFIP1L1组细胞迁移距离及迁移侵袭数量与对照组相比减短及减少(P<0.05);(8)细胞划痕愈合实验及Transwell迁移侵袭实验结果显示,miR-1253mimic的迁移距离及迁移侵袭细胞数量与对照组相比增长及增多(P<0.05);miR-1253 inhibitor组细胞迁移距离及迁移侵袭细胞数量与对照组相比减短及减少(P<0.05);(9)细胞划痕愈合实验及Transwell迁移侵袭实验结果显示,circFIP1L1组与circFIP1L1+miR-1253mimic组与circFIP1L1 NC组比,迁移距离及迁移侵袭细胞数量相比减短及减少(P<0.05);circFIP1L1+miR-1253mimic组与circFIP1L1组相比迁移距离及迁移侵袭细胞数量增长及增多(P<0.05),而circFIP1L1+miR-1253mimic组与circFIP1L1NC组相比迁移距离及迁移侵袭细胞数量变化无明显差异(P>0.05);(10)裸鼠成瘤实验显示,与对照组相比,circFIP1L1组体内形成的NPC肿瘤体积减小、重量减轻(P<0.05)。结论:(1)过表达circFIP1L1可以使miR-1253表达量降低,SFN表达量升高。(2)circFIP1L1通过海绵吸附miR-1253靶向SFN调控EMT抑制鼻咽癌迁移和侵袭。