露蜂房(Nidus Vaspe)中活性蛋白及多肽的分离纯化和性质鉴定

来源 :中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qiaoqiao06242005
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药用露蜂房(Nidus Vaspae)经剪碎,乙醇脱脂,低温水提,获得水提物.从水提物中 分离纯化得到两个新蛋白质,分别命名为NV-PP-4、NV-PP-5.露蜂房水提物经Sephadex G-50凝胶过滤柱层析、DEAE-Sephadex A50阴离子交换柱层析、羟基磷灰石柱层析等多步纯化, 最后采用HPLC,以TSK 2000SW亲水性分子排阻色谱柱纯化得到NV-PP-4.采用不同色谱柱及 多种流动相体系证明NV-PP-4具有较高的纯度.亲水性分子排阻HPLC测得其分子量为8.711KD,用毛细管电泳测得其等电点为1.79,氨基酸分析表明NV-PP-5含87个氨基酸残基,其中含 较多的Asp(Asn)、Glu(Gln)、Gly、Ser、Pro.从水提物中还分离纯化得到一糖蛋白,命名 为NV-PP-5具有较高的纯度.蒽酮比色法测定NV-PP-5的含糖量为24.9%,亲水性分子排阴HPLC测得其分子量为10.497KD,以超薄等电聚焦电泳确定其等电点为4.6,氨基酸组成分析表 明NV-PP-5含有93个氨基酸残基,其中Glu(Gln)、Asp(Asn)、Thr、Ser含量丰富.
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