雌激素受体ER是一种核受体类转录因子,主要调节与雌激素有关基因的转录,在乳腺癌的发生发展过程中具有重要作用,是乳腺癌治疗的靶标和预后的指标之一。ER分为ERa和ERp两种,两者在结构和功能上有相似之处,但又不完全相同,都含两个重要的转录激活结构域AF1和AF2。AF1和AF2的有效转录激活作用依赖于与其它蛋白质的相互作用。目前,乳腺癌的内分泌治疗主要是通过降低ER转录活性来实现的,因此ER共调节因子的发现和功能研究对于有效开发治疗乳腺癌的药物具有重大意义。在人类的许多重大疾病包括肿瘤的发生发展过程中,DNA和组蛋白修饰等表观遗传修饰也具有非常重要的作用。多数表观遗传的改变是可逆的,这就为疾病的治疗提供了乐观的前景。其中,组蛋白修饰有丰富的多样性并且在基因表达调控中发挥重要作用,这些修饰可影响组蛋白与DNA的亲和性,进而改变染色质的状态,或者影响转录因子与DNA序列的结合,最终导致下游基因转录激活或抑制。越来越多证据表明,组蛋白修饰与肿瘤的发生发展有关,因此,对组蛋白修饰的进一步研究,对于肿瘤等重大疾病的诊断、防治和预后判断有重要意义,为肿瘤的治疗及相应药物开发研究提供了新的靶标。GA9是一个未知蛋白,目前还没有相关研究报道。本研究是在酵母双杂交的基础上对GA9做进一步研究,旨在确定GA9在乳腺癌组织细胞中的表达及定位、GA9与ER之间的相互作用以及对GA9下游基因转录的影响,从而对GA9的生物学功能作一初步探讨。Western blot分析表明,GA9在乳腺癌细胞系中均有表达。细胞免疫荧光和免疫组化实验确定了GA9在乳腺癌组织和细胞的表达定位为细胞核。通过GST-pull down实验证明,GA9在体外能与ER相互作用；免疫共沉淀实验证明,GA9可以在体内以雌激素不依赖的方式与ER相互作用,GA9与ER的AF1、AF2结构域结合。活性实验表明,在乳腺癌细胞中,GA9通过与ER的相互作用抑制雌激素应答元件基因的转录并且存在剂量效应,同时利用GA9 siRNA敲低GA9的内源表达能升高ER的转录活性。进一步研究发现,在乳腺癌细胞中过表达GA9能降低雌激素应答蛋白的表达；而GA9 siRNA敲低GA9表达后,雌激素应答蛋白的表达增强。这些实验结果表明,GA9是一个新型的ER共抑制因子。同时,本研究还从乳腺cDNA文库中钓取核心组蛋白H2A、H2B、H3和H4基因,将其构建到实验所需的原核及真核表达载体上,这些重组质粒在相应的原核、真核细胞中都得到了正确的表达。GST-pull down实验表明,GA9能同核心组蛋白H2A、H2B、H3和H4相互作用。进一步进行甲基化分析表明,GA9可能与组蛋白甲基化修饰有关。综上所述,GA9可能是ER信号通路中的一个新型共调节因子,通过与ER相互作用影响ER下游信号的传递,进一步的深入研究将有助于了解ER信号通路的调控机制以及GA9的临床治疗作用,有可能为乳腺癌的治疗提供一个新的靶标。