研究背景：胸腺素β4是真核细胞中一种重要的肌动蛋白螯合分子,广泛分布于人体内大部分组织和细胞中,具有多方面生物学活性,并参与细胞迁移、血管形成、炎症反应等多种病理生理过程。目前已有较多研究表明,胸腺素β4在组织损伤修复,尤其是皮肤创伤愈合过程中起到重要作用。目的：利用基因重组技术在原核表达系统中克隆表达人胸腺素β4蛋白,检测纯化蛋白产物的生物学活性和在小鼠皮肤创伤愈合模型中的作用,为建立一种简便易行的在体外制备具有生物学活性的胸腺素β4蛋白的工艺方法,及研究其在皮肤创伤愈合中的作用机制奠定基础。方法：采用基因重组方法将胸腺素β4基因克隆至原核表达载体pTXB1,诱导其融合蛋白Tβ4-intein-CBD在大肠杆菌中的表达；Chitin亲和纯化表达产物,采用HPLC、N端测序及Western blot等分析手段对纯化蛋白进行鉴定；在3T3小鼠胚胎成纤维细胞中应用MTT法检测蛋白产物的生物学活性,并通过建立小鼠皮肤创伤模型,制作切片进行组织形态学观察,来研究重组人胸腺素β4在皮肤组织损伤修复中的作用。结果：通过基因重组方法成功构建了原核表达载体pTXB1-Tβ4,能够在IPTG诱导下在大肠杆菌BL21(DE3)中有效表达融合蛋白Tβ4-intein-CBD;表达的融合蛋白经Chitin亲和纯化和分子筛精制后能够得到纯度较高的重组人胸腺素β4蛋白产物,且经鉴定理化性质不变；MTT显示表达纯化的重组人胸腺素β4蛋白对3T3成纤维细胞分裂增殖具有促进作用,其结果经数据统计分析与对照组相比具有显著差异(P<0.05)；对小鼠皮肤创伤模型的组织形态学观察结果显示,重组人胸腺素β4蛋白能够促进表皮细胞迁移,血管再生及胶原蛋白的沉积,并且能够促进毛囊增生。结论：通过基因重组构建的原核表达载体pTXB1-Tβ4,在大肠杆菌中表达融合蛋白Tβ4-intein-CBD,并采用Chitin亲和层析的方法纯化目的蛋白,是一种简单有效的制备重组人胸腺素β4蛋白的方法,得到的蛋白产物具有一定的生物学活性,并且能够促进皮肤组织的创伤的愈合。