泛素交联酶Rad6B缺失对皮肤线粒体的影响及其机制研究

来源 :兰州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:weiying
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:Rad6B是一种E2泛素交联酶(E2),我们的前期研究表明,Rad6B的缺失会导致DNA损伤修复的缺陷,神经元更容易衰老。最近我们发现Rad6B缺失会导致小鼠皮肤衰老,但其在皮肤组织中的作用及其机制仍不清楚。本研究探讨随着年龄的增长Rad6B的缺失对皮肤组织中线粒体功能的影响及是否导致皮肤易于衰老。发掘Rad6B发挥作用潜在的靶基因,为皮肤衰老病理和治疗提供依据。方法:通过配对繁殖获取基因敲除小鼠和同窝野生对照小鼠。至1月龄、3月龄、12月龄分组。用小鼠皮肤取材和包埋技术进行组织切片,HE、Masson、Oil red-O染色观察皮肤组织的厚度、胶原纤维的含量、以及皮下脂滴数量的变化;通过免疫组化,PCNA、PGC-1α分别标记皮肤组织的增殖和线粒体生物合成情况;qRT-PCR法筛选与皮肤增殖和代谢相关的因子;Western blotting法检测线粒体呼吸链上五种复合体、线粒体融合和分裂及衰老相关蛋白的表达并探索Rad6B的底物;ATP含量检测试剂盒检测小鼠皮肤组织的ATP含量;提取皮肤原代成纤维细胞,通过线粒体红色荧光探针和免疫荧光ND1、COX4染色观察其线粒体的膜电位和线粒体电子传递链上复合体Ⅰ、Ⅳ在线粒体上的共定位;以及DCFH-DA荧光探针观察细胞内活性氧ROS产生的水平;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老;CCK-8法及RTCA测定皮肤原代成纤维细胞的活力和增殖;透射电子显微镜检测细胞内线粒体状态;用海马XF24细胞外通量分析仪检测细胞耗氧量(OCR)和细胞外酸化率(ECAR)。结果:1、HE、Masson、油红O染色发现WT和KO小鼠的皮肤表型随着年龄的增长差异明显,表明敲除Rad6B可能会引起小鼠皮肤生理结构的改变;2、通过Western Blot、qRT-PCR、免疫组化实验,检测到Rad6B的缺失影响了皮肤的增殖和代谢,在各组中出现了不同的变化,尤其在1月龄和12月龄的小鼠群体中差异尤为明显;3、通过免疫印迹观察Rad6B缺失后降低了线粒体复合体I和IV的活性,线粒体动力学在老龄时下降,因此损害了线粒体功能。4、Rad6B敲除会导致皮肤原代成纤维细胞的线粒体膜电位和结构、细胞活力和增殖、ROS水平异常和细胞衰老;5、随着年龄的增长,Rad6B敲除导致皮肤原代成纤维细胞的能量代谢改变,这可能是通过重新编程代谢网络,从而弥补了老龄KO小鼠皮肤原代成纤维细胞ATP生成的缺乏。结论:总之,这些发现表明随着年龄的增长Rad6B的缺失会导致小鼠皮肤胶原纤维含量降低,皮肤细胞增殖减少,线粒体复合体活性降低,线粒体功能下降,以及线粒体能量代谢紊乱,加速小鼠的皮肤衰老。因此,Rad6B可能对维持正常的组织代谢和线粒体功能至关重要。
其他文献
Diophantine方程和Smarandache函数的均值问题是数论中两个极为重要的课题,它们的研究成果极大的丰富了数论内容,但仍有一些尚未解决的问题引起了不少学者的关注及研究.本文利用初等方法、解析方法、代数数论的方法研究了两类Diophantine方程求解问题,以及包含Smarandache函数的均值问题,主要成果如下:1.利用代数数论的方法讨论了Diophantine方程Ax2+B=Cyn
油茶果由茶壳和茶籽组成,茶壳对制取茶油不利,需进行脱壳处理。提高机械化脱壳程度有利于油茶产业的发展。目前我国油茶果破壳机械以挤压碾搓式和撞击式为主。挤压碾搓式破壳
目的:DRAK1即丝/苏氨酸激酶17A(STK17A),是一种普遍表达的激酶,最初被认定为是细胞凋亡的调节因子。其在恶性肿瘤中的表达及生物学功能是局限的,并且其在非小细胞肺癌中的角
背景重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是重症医学科较常见的疾病之一,作为胰腺炎最严重的一种分型,其突出特点为起病很急、进展非常迅速、病死率极高,该疾病可
皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)、杂色鲍(H.diversicolor)、西氏鲍(H.gigantea)和绿鲍(H.fulgens)等4种鲍在我国鲍类养殖业中具有重要地位,种业发展需求强烈。然而,其遗传
大黄鱼(Pseudosciaena crocea)是我国单一品种养殖量最大的海水鱼类之一。近年来,大黄鱼养殖业的健康发展受到了病害的严重制约。“内脏白点病”是网箱养殖大黄鱼最常见的病
背景:速激肽受体广泛表达于胃肠道神经元与效应细胞,对维持正常的胃肠道功能至关重要。速激肽由TAC1、TAC3和TAC4三种基因编码,其中TAC4编码HK-1和Endokinins(EKs):Endokinin A
目的:DOT1L作为H3K79的甲基转移酶,被发现在某些恶性肿瘤中扩增和过表达。本研究旨在检测DOT1L在正常胃组织和胃癌组织中表达差异及对胃癌患者生存预后影响,并且检测DOT1L是
细胞周期活动是生物体最基本的生理活动之一,细胞周期调控因子(CDC48)通过激活周期蛋白依赖激酶(CDK)参与调控细胞分裂。细胞分裂活动的重启与植物体细胞胚胎发生能力的获得和愈
鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)是黄杆菌科的革兰阴性菌,在世界范围内发生和流行,给养鸭业带来了巨大的经济损失。而抗生素作为预防和治疗的有效手段却因临床上