虚寒证、虚热证人群线粒体呼吸链模块功能研究

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目的通过对虚寒证、虚热证线粒体呼吸链模块功能及不同环境温度对其功能影响的研究,探索不同环境条件下虚寒证、虚热证线粒体呼吸链模块功能的变化规律,以期从能量代谢角度探讨虚寒证、虚热证证候特征的可能发生机制,为从分子水平揭示虚寒证、虚热证的发生内涵奠定理论基础。方法以2012年11月在校的河南中医学院1-3年级本科生为研究对象,通过《中医体质量表》和专家诊断筛选出典型虚寒证组、虚热证组及正常对照组人群,再从筛选出的各组人群中分别随机选出20例,组成被试组。各组被试人员进入实验室后,分别处于低温(约-4℃-5℃)环境30分钟、室温(23℃‐25℃)环境20分钟,然后采集肘静脉血液,用分光光度计法检测呼吸链复合体酶活性、流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果1、复合体Ⅰ酶活性变化规律:○1不同证型组间的比较:两种温度下,三组证型复合体Ⅰ酶活性表现为虚热证组>正常对照组>虚寒证组。低温下,与正常对照组相比,虚寒证组复合体Ⅰ酶活性差异有统计学意义(P<0.05),虚热证组复合体Ⅰ酶活性差异无统计学意义(P>0.05);虚寒证组与虚热证组复合体Ⅰ酶活性差异有统计学意义(P<0.05)。室温下各组别结果和低温条件下一致。○2不同环境温度下同一组别复合体Ⅰ酶活性表现:与室温相比,低温下,三组复合体Ⅰ酶活性均升高,但只有正常对照组复合体Ⅰ酶活性差异有统计学意义(P<0.05),虚热证组、虚寒证组复合体Ⅰ酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。○3复合体Ⅰ酶活性调节速率变化规律:低温下,与正常对照组相比,虚寒证组、虚热证组调节速率均降低,差异均无统计学意义(P>0.05),虚热证组与虚寒证组差异也无统计学意义(P>0.05),室温下各组别结果与低温一致;低温下,与室温相比,三组人群复合体Ⅰ活性调节速率均增高,但只有正常对照组人群线粒体复合体Ⅰ调节速率差异有统计学意义(P<0.05);虚寒证与虚热证组的差异均无统计学意义(P>0.05)。2、复合体Ⅱ酶活性变化规律:○1不同证型组间的比较:两种温度下,三组证型复合体Ⅱ酶活性表现为虚热证组>正常对照组>虚寒证组。低温下,与正常对照组相比,虚寒证组复合体Ⅱ酶活性差异有统计学意义(P<0.05),虚热证组复合体Ⅱ酶活性差异无统计学意义(P>0.05);虚寒证组与虚热证组复合体Ⅱ酶活性差异有统计学意义(P<0.05)。室温下各组别结果和低温条件下一致。○2不同环境温度下同一组别复合体Ⅱ活性表现:与室温相比,低温下,三组复合体Ⅱ酶活性均升高,但只有正常对照组复合体Ⅱ酶活性差异有统计学意义(P<0.05),虚热证组、虚寒证组复合体Ⅱ酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。○3复合体Ⅱ酶活性调节速率变化规律:低温下,与正常对照组相比,虚寒证组、虚热证组调节速率均降低,差异有统计学意义(P<0.05),虚热证组与虚寒证组差异无统计学意义(P>0.05),室温下各组别结果与低温一致;低温下,与室温相比,三组人群复合体Ⅱ活性调节速率均增高,正常对照组、虚热证组人群线粒体复合体Ⅱ调节速率差异有统计学意义(P<0.05);虚寒证组差异无统计学意义(P>0.05)。3、复合体Ⅲ酶活性变化规律:○1不同证型组间的比较:两种温度下,三组证型复合体Ⅲ酶活性表现为虚热证组>正常对照组>虚寒证组。低温下,与正常对照组相比,虚寒证组、虚热证组复合体Ⅲ酶活性差异均无统计学意义(P>0.05);虚寒证组与虚热证组复合体Ⅲ酶活性差异有统计学意义(P<0.05)。室温下各组别结果和低温条件下一致。○2不同环境温度下同一组别复合体Ⅲ活性表现:与室温相比,低温下,三组复合体Ⅲ酶活性均升高,且三组复合体Ⅲ酶活性差异均有统计学意义(P<0.05)。○3复合体Ⅲ酶活性调节速率变化规律:低温下,与正常对照组相比,虚寒证组、虚热证组调节速率均降低,差异均无统计学意义(P>0.05),虚热证组与虚寒证组差异也无统计学意义(P>0.05),室温下各组别结果与低温一致;低温下,与室温相比,三组人群复合体Ⅲ酶活性调节速率均增高,正常对照组、虚热证组、虚寒证组人群线粒体复合体Ⅲ调节速率差异均有统计学意义(P<0.05)。4、复合体Ⅳ酶活性变化规律:○1不同证型组间的比较:两种温度下,三组证型复合体Ⅳ酶活性表现为虚热证组>正常对照组>虚寒证组。低温下,与正常对照组相比,虚寒证组复合体Ⅳ酶活性差异有统计学意义(P<0.05),虚热证组复合体Ⅳ酶活性差异无统计学意义(P>0.05);虚寒证组与虚热证组复合体Ⅳ酶活性差异有统计学意义(P<0.05)。室温下各组别结果和低温条件下一致。○2不同环境温度下同一组别复合体Ⅳ活性表现:与室温相比,低温下,三组复合体Ⅳ酶活性均升高,但只有正常对照组、虚热证组复合体Ⅳ酶活性差异有统计学意义(P<0.05),虚寒证组复合体Ⅳ酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。○3复合体Ⅳ酶活性调节速率变化规律:低温下,与正常对照组相比,虚寒证组、虚热证组调节速率均降低,虚寒证差异有统计学意义(P<0.05),虚热证无统计学意义(P>0.05),虚热证组与虚寒证组差异也无统计学意义(P>0.05),室温下,与正常对照组相比,虚寒证组、虚热证组调节速率均降低,且差异均有统计学意义(P<0.05),虚热证组与虚寒证组差异也有统计学意义(P<0.05);低温下,与室温相比,三组人群复合体Ⅳ酶活性调节速率均增高,正常对照组、虚热证组人群线粒体复合体Ⅳ调节速率差异均有统计学意义(P<0.05),虚寒证组差异无统计学意义(P>0.05)。5、复合体Ⅴ酶活性变化规律:○1不同证型组间的比较:两种温度下,三组证型复合体Ⅴ酶活性表现为虚热证组>正常对照组>虚寒证组。低温下,与正常对照组相比,虚寒证组、虚热证组复合体Ⅴ酶活性差异均无统计学意义(P>0.05);虚寒证组与虚热证组复合体Ⅴ酶活性差异也无统计学意义(P>0.05)。室温下各组别结果和低温条件下一致。○2不同环境温度下同一组别复合体Ⅴ活性表现:与室温相比,低温下,三组复合体Ⅴ酶活性均升高,且三组复合体Ⅴ酶活性差异均有统计学意义(P<0.05)。○3复合体Ⅴ酶活性调节速率变化规律:低温下,与正常对照组相比,虚寒证组、虚热证组调节速率均降低,差异无统计学意义(P>0.05),虚热证组与虚寒证组差异也无统计学意义(P>0.05),室温下各组别结果与低温一致;低温下,与室温相比,三组人群复合体Ⅴ酶活性调节速率均增高,正常对照组、虚热证组、虚寒证组人群线粒体复合体Ⅴ调节速率差异均有统计学意义(P<0.05)。6、线粒体膜电位变化规律:○1不同证型组间的比较:两种温度下,三组证型线粒体膜电位的变化规律为正常对照组>虚热证组>虚寒证组。低温下,与正常对照组相比,虚寒证组、虚热证组膜电位差异均有统计学意义(P<0.05),虚寒证组与虚热证组线粒体膜电位差异无统计学意义(P>0.05);室温下,与正常对照组相比,虚寒证组、虚热证组膜电位差异均无统计学意义(P>0.05),虚寒证组与虚热证组线粒体膜电位差异无统计学意义(P>0.05)。○2不同环境温度下同一组别膜电位表现:与室温相比,低温下正常对照组、虚热证组线粒体膜电位升高,正常对照组线粒体膜电位差异有统计学意义(P<0.05)。虚寒证组虽室温条件下膜电位略高于低温条件,但无统计学意义(P>0.05),结论虚寒证组、虚热证组人群体内与能量生成有关的线粒体呼吸链五个复合体功能、膜电位均异常,且当环境温度变化时,虚寒证、虚热证人群机体酶活性调节能力均不足,这可能是虚寒证、虚热证发生的物质基础,其具体机制还有待进一步研究。
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