混合模式层析是一种新型的生物分离方法,其功能配基兼具多种相互作用模式,吸附容量大,选择性高,洗脱条件温和。本文结合亲硫层析和疏水性电荷诱导层析,筛选新型混合模式配基,制备新介质,并用于牛初乳免疫球蛋白的分离纯化。亲硫层析对免疫球蛋白的特异性吸附需借助高盐浓度实现,而疏水性电荷诱导层析具有非盐依赖的吸附特性,本文结合两者优点,新型配基兼具亲硫作用、疏水作用和静电作用,在高盐和低盐条件下都可以高效吸附免疫球蛋白,且吸附能力随pH改变呈显著变化,可以实现高效洗脱。本文研究包括介质制备、吸附性能测定和牛初乳免疫球蛋白分离三部分。以Bestarose4FF琼脂糖凝胶微球为基质,经二乙烯基砜活化,偶联4-巯基乙基吡啶、2-巯基咪唑、2-巯基-1-甲基咪唑和3-巯基-1,2,4-三氮唑等4种配基,制备了新型混合模式介质,分别命名为Bestarose-DVS-MEP、Bestarose-DVS-MI、 Bestarose-DVS-MMI和Bestarose-DVS-MT。优化了基质活化和配基偶联的反应条件,配基密度约为60～70μmol/ml基质,偶联效率约60%。考察了新型混合模式介质对牛初乳免疫球蛋白的静态吸附性能和吸附动力学。结果表明,4种新介质具有吸附容量大和非盐依赖性吸附的特点,增加硫酸盐浓度能加快吸附过程,且对吸附量影响较小。Bestarose-DVS-MEP、 Bestarose-DVS-MI和Bestarose-DVS-MMI对pH敏感,pH7吸附容量高,pH4可实现牛初乳免疫球蛋白的解吸。新型混合模式层析从牛初乳蛋白粉溶液中分离免疫球蛋白。比较了不同介质的分离效果,发现Bestarose-DVS-MI是最合适的介质。进一步优化了层析分离条件,选择pH7进样,pH4洗脱,进样浓度25mg/ml,进样量1ml,牛初乳免疫球蛋白纯度达95%,纯化因子为6.2,收率约64.2%。本文筛选出2-巯基咪唑作为混合模式新配基,制备了新型混合模式介质,用于分离牛初乳免疫球蛋白,取得了较好的结果,为牛初乳高附加值产品制备提供了新方法。