苹果砧木G.41再生和遗传转化体系的建立与优化

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苹果砧木对苹果的生产起着重要作用。它对接穗的表现性状,如树势、果实大小、果实成熟度和营养价值等起到了非常关键的作用。本研究通过组织培养的方法建立了苹果砧木G41的再生体系;建立和优化了 G41的遗传转化体系;利用Gateway构建载体技术,成功创建了 MpNCED2基因的植物超表达载体,采用农杆菌介导法将MpNCED2基因分别转入拟南芥和G41中,获得了转基因的抗性植株。研究结果为G.41砧木的利用提供了基础。主要的试验结果如下:1.通过对植物生长激素、叶片创伤方式和叶片放置方式的优化,获得了简单高效的G41再生体系。其中,在MS培养基中添加3.55μM BA和0.16μM IBA的继代培养中获得了最好的芽增殖系数(2.58);当叶片划伤处理且近轴面朝上放入添加了 2.7μMTDZ和0.9μMNAA的MS再生培养基中,获得了 G41最高的不定芽再生率(99%);而在添加了 4.92μM IBA的MS生根培养基中,得到了 G.41最优生根率(80%);并且不定芽诱导的生根试管苗已成功在本实验室及温室移栽驯化。2.通过对苹果砧木G41遗传转化体系的构建和优化,获得了 G.41叶片最适的Kana选择压为4mg/L和最适的抑菌素(Cef)浓度为200mg/L。3.利用Gateway构建载体方法,成功构建了MpNCED 基因的植物超表达载体,并通过根癌农杆菌(EHA105)介导法,将MpNCED2基因成功转入拟南芥中,得到了11个T3代拟南芥超表达株系;同时将其转入苹果砧木G41中,得到了苹果的抗性植株。在G41叶片转化过程中,有助于根癌农杆菌侵染叶片的最宜干燥时间是5 min;有利于根癌农杆菌侵染叶片的Silwetl-77浓度是零。
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