论文部分内容阅读
目的:本课题通过对正常家兔予降浊颗粒中药制剂灌胃获取含药血清,将其作用于体外小鼠成纤维细胞的血清药理学方法,来观察降浊颗粒中药制剂含药血清对小鼠成纤维细胞的形态及细胞增殖周期的影响,从而探讨该复方制剂在防治肾脏纤维化方面的作用机制。方法:选健康雄性正常家兔16只,随机分成四组(4只/组),正常喂养一周后分别按实验设计要求予灌胃处理,制备所需含药血清。灌胃给药采取每天给药一次,共7天,于灌胃前禁食12小时,不限制饮水。①对照组,予蒸馏水灌胃;②低剂量组,予降浊颗粒复方制剂制成的低浓度中药溶液灌胃,降浊颗粒制剂的等效剂量为2.1g/(kg·d);③中剂量组,予降浊颗粒复方制剂制成的中浓度中药溶液灌胃,降浊颗粒复方制剂的等效剂量为4.2g/(kg·d);④高剂量组,予降浊颗粒复方制剂制成的高浓度中药溶液灌胃,降浊颗粒复方制剂的等效剂量为8.4g/(kg·d)。于末次灌胃1h后颈动脉插管取血,制备所需复方制剂含药血清。小鼠成纤维细胞进行正常培养,每天换液一次,三天传代一次,收集对数期小鼠成纤维细胞,用不含血清的DMEM培养基制成2x106/ml悬液,将其接种至6孔板中,每孔细胞悬液量为2.5ml。培养18h后更换培养基并开始实验。结果:本研究将三组不同浓度的复方制剂含药血清加入到成纤维细胞中进行培养,发现三组含药血清均可抑制成纤维细胞的增殖,且不同浓度的复方制剂含药血清对细胞增殖周期的抑制程度有所不同。细胞增殖周期分为分裂间期和分裂期两个阶段,分裂间期又可分为G0/G1期、S期、G2期。本实验最后结果显示:三组降浊颗粒含药血清组细胞的G0/G1期所占百分比均大于对照组,而三组降浊颗粒血清组细胞S期所占百分比均小于对照组,且以上结果中对G0/G1期、S期的作用显示出与此复方制剂含药血清浓度呈剂量依赖性关系,经统计学处理,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:高、中、低浓度组降浊颗粒含药血清均可抑制小鼠成纤维细胞的生长及有丝分裂,即降浊颗粒可抑制成纤维细胞的增殖,且降浊颗粒复方制剂含药血清对体外小鼠成纤维细胞增殖的抑制作用随着复方制剂含药血清浓度增加而增强。