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乙醇脱氢酶(ADH)是参与乙醇在体内代谢的主要酶。ADH抑制剂可以通过抑制ADH的活性,达到缓解酒精中毒的目的,也是目前临床上使用的毒性醇中毒解毒药物。目前现有的ADH抑制剂价格昂贵且副作用多。近年来的研究发现,天然的活性物质作为药物时副作用更小,安全性更高,更符合患者对绿色天然的健康需求。然而天然产物种类繁多、成分复杂、有效成分含量低,传统的天然产物活性成分筛选方法费时、费力而且效率低下。天然产物复杂体系中活性物质的快速筛选与分离也一直是中草药研究的热点和难点问题。近年来,在快速筛选活性物质的新方法中,基于生物亲和作用的靶向筛选引起了研究者的关注。本论文针对中草药中ADH抑制剂的靶向筛选和分离开展研究。主要研究工作如下：1.制备了Fe3O4@SiO2磁性纳米粒子,并以该纳米粒子为载体、戊二醛为交联剂对ADH进行固定化。测定了固定化酶中ADH的负载量。探讨了温度和pH对固定化ADH和游离ADH活性的影响。结果显示ADH被固定化后,酶的热稳定性和pH稳定性均比游离ADH有所增强,并且固定化ADH有很好的重复利用性和稳定性。采用Fe3O4@SiO2-ADH磁性纳米粒子靶向筛选甘草中的ADH抑制剂,考察并优化了筛选条件,结果筛选得到9个ADH抑制剂,其中7个物质是首次被筛选出的具有ADH抑制活性的物质。2.构建了超过滤结合高速逆流色谱靶向筛选和分离甘草中ADH抑制剂的新方法。考察并优化了酶浓度、孵育时间、pH和温度等超过滤条件对筛选的影响。在最优条件下对甘草提取液进行ADH抑制剂的筛选,最终发现3个活性化合物具有抑制作用。结合高速逆流色谱对这些活性化合物进行分离,溶剂体系为乙酸乙酯-甲醇-水(5：4：1)。通过对分离得到的化合物进行结构鉴定,这3个化合物分别为甘草苷、异甘草苷和甘草素。其中异甘草苷的ADH抑制活性最强,其IC50为8.95μM。3.研究建立了超过滤结合高效液相色谱靶向筛选广金钱草中ADH抑制剂的方法。考察优化了酶浓度、孵育时间、pH和温度对筛选的影响。在最优条件下采用超过滤对广金钱草提取液进行筛选,最终筛选得出2个ADH抑制剂,通过与实验室标准化合物比照,这2个化合物分别为香树素和芒柄花黄素。其中香树素是首次被发现的具有ADH抑制活性的物质。