论文部分内容阅读
目的建立大鼠溃疡性结肠炎模型,运用实验检测指标,研究中药复方肠宁汤对溃疡性结肠炎大鼠血清促炎细胞因子肿瘤坏死因子TNF-α和抗炎细胞因子白细胞介素10的影响,比较肠宁汤与柳氮磺胺吡啶的治疗效果,并初步探讨中药肠宁汤防治溃疡性结肠炎可能的作用机制,为肠宁汤的临床应用和进一步开发提供实验科学依据。方法健康雄性SD大鼠78只随机分为4组(A组:肠宁汤组、B组:柳氮磺胺吡啶组、C组:模型组、D组:正常组),A、B、C组各22只,D组12只,置于空调房间(22℃左右)适应性喂养1周。应用2,4-二硝基氯苯免疫加乙酸局部灌肠法建立溃疡性结肠炎大鼠模型,除正常组外,其余组均造模。造模完成后每日给与常规饮食,不与任何干预,观察2周。正常组造模前后均予常规饮食,不给任何干预。造模成功后,肠宁汤组:给予配制的肠宁汤液,按传统方法配制成含生药浓度为200g/L的水煎剂2 mL灌胃,1次/d;柳氮磺胺吡啶组:给予柳氮磺胺吡啶混悬液2mL在造模后灌胃,1次/d;模型组:以生理盐水2mL灌胃,1次/d。各组均给药28d,正常组不给任何干预。标本采集分两次进行:第一次:造模完成后,治疗开始前一天,大鼠禁食不禁水24小时后,随机抽取A、B、C组大鼠各10只,D组6只,脱颈椎处死,立即打开腹腔,自肛门2cm处向上取结肠6-8cm,用放大镜观察炎症及溃疡发生情况,然后投入到事先准备好的装有4%多聚甲醛固定液的小瓶中,4℃保存,常规石蜡包埋,切片,HE染色,光镜观察。第二次采集标本:治疗满4周,实验结束前一天记录大鼠体重,大鼠禁食不禁水24小时后,所有大鼠均摘眼球取血4-6ml,置于预先标记好的试管中做IL-10、TNF-a检测,采血后处死,剖腹取结肠。方法及处理同第一次标本采集。结果1肠宁汤对溃疡性结肠炎大鼠一般状况的影响治疗2周后,A组进食量开始增加,大便性状好转,未再见粘液脓血便,但部分大鼠仍可见稀便;B组进食量无明显增加,粘液脓血便减少,部分大鼠仍有稀糊状大便。治疗4周后,A组大鼠未再出现稀便,活动正常,皮毛恢复光泽,体重明显增加;B组大便性状明显好转,活动正常,皮毛光泽,体重增加;C组治疗2周后大便性状、进食量等无明显改善,体重进一步下降;至4周后,仍见部分大鼠大便呈稀糊状,并有精神倦怠、反应迟钝、皮毛疏松无光泽等表现;D组大鼠一般状况良好,体重明显增加。2肠宁汤对UC大鼠结肠粘膜损伤指数(CMDI分)的影响治疗前A、B、C三组大鼠CMDI(分)较D组显著升高(P<0.01);治疗后,A、B两组CMDI(分)显著降低,与D组比较无明显差异(P>0.05);与C组比较有显著差异(P<0.05)3病理结构观察治疗前,结肠标本HE染色显示:A、B、C三组粘膜及粘膜下层高度充血、水肿,有糜烂和溃疡形成,局部见坏死。大量炎性细胞、嗜酸性细胞浸润,腺体中杯状细胞显著减少。治疗后A、B两组粘膜充血水肿消失,糜烂和溃疡基本愈合,残存溃疡有明显修复性改变,如粘膜上皮修复,肉芽组织增生等,炎性细胞浸润亦有所缓解。C组无明显变化。4肠宁汤对UC大鼠血清TNF-a、IL-10的影响①大鼠血清肿瘤坏死因子含量:模型组均明显高于正常组(P<0.01),柳氮磺胺吡啶组和肠宁汤组明显低于模型组(P<0.01),肠宁汤组明显低于柳氮磺胺吡啶组(P<0.01)。②大鼠血清白细胞介素10含量:模型组明显低于正常组(P<0.01),柳氮磺胺吡啶组和肠宁汤组明显高于模型组(P<0.01),肠宁汤组明显高于柳氮磺胺吡啶组(P<0.05)。结论2,4-二硝基氯苯联合乙酸局部灌肠模型比较理想,既符合溃疡性结肠炎发生的免疫学机制,又符合其肠道炎症发作期的特点,适合其作用机理探讨和药物疗效比较。通过实验发现:①肠宁汤有上调抗炎细胞因子白细胞介素10,下调促炎细胞因子肿瘤坏死因子TNF-a的作用,使溃疡性结肠炎大鼠免疫功能恢复正常,达到治疗的目的;②初步证明了免疫异常在UC发病机理中起重要作用;③肠宁汤对溃疡性结肠炎干预效果优于柳氮磺胺吡啶。