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Signal Transducer and Activator of Transcription 3(STAT3)受细胞因子、生长因子等的激活,在细胞生长、抗凋亡和细胞转化上起着重要的作用。人类多数肿瘤细胞中均有高于正常活性的 STAT3。GRIM19(Genes associated with Retinoid-IFN-induced Mortality)是维甲酸干扰素诱导的死亡相关基因,它能直接特异性作用于 STAT3,抑制 STAT3 激活靶基因转录的活性、抑制靶基因表达,从而抑制肿瘤的生长。肿瘤的靶向治疗需要特异性载体,将药物导向肿瘤。编码含人类高迁移组蛋白 2(HMGN2)氮端 31 个氨基酸的 F3 肽具有特异性与肿瘤细胞和肿瘤血管内皮细胞结合的功能,能将药物带入胞质和胞核,可以用作肿瘤靶向给药的载体。 本课题运用基因克隆技术,从人胎盘组织中克隆了 GRIM19 的cDNA,并构建了 F3-GRIM19 表达载体。利用大肠杆菌表达体系表达 F3-GRIM19,亲和层析纯化获得 F3-GRIM19 融合蛋白,并鉴定了融合蛋白体外抗肿瘤细胞增殖的生物学活性,为进一步研究其作用机理和临床应用奠定基础。 第一部分:以中国人胎盘组织为材料,提取组织总 RNA,用 RT-PCR方法扩增出 GRIM19 的 cDNA,克隆入 pET32a(+)载体中并测序鉴定,亚克隆构建原核表达载体 pQE30-GRIM19 及 pQE30-F3-GRIM19,IPTG 诱导表达。用 Ni2+-NTA 琼脂糖树脂亲和层析对 GRIM19 和 F3-GRIM19 进行纯化,并透析复性。 第二部分:利用 MTT 比色法分析目的蛋白 GRIM19 和 F3-GRIM19 分别对正常 HUVEC 细胞和人乳腺癌 MCF7、MDA-MB231 细胞增殖活性的影