抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中药高效成分的体外筛选及其抗病毒机制的研究

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目的:猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiration syndrome, PRRS),又称为蓝耳病,是一种传染性较强的常见猪病,病毒具有极易变异的特点,爆发后会给养猪业造成极大的经济损失。目前针对该病主要采用注射疫苗进行预防的手段,可以起到一定作用,但尚没有针对PRRS的有效治疗方法。本试验选取从常见抗病毒中草药金银花、板蓝根和淫羊藿中提取的天然化合物绿原酸、表告依春和淫羊藿苷,以Marc-145细胞为体外模型,研究其是否具有体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用,是否能够有效抑制由PRRSV引起的细胞凋亡,并初步探讨这些中药主要成分的抗病毒机制。方法:(1)通过采用细胞病变法(cytopathologic effect, CPE)以及噻唑蓝比色法(3-(4,5-dimethyithiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT)来测定中药提取物在Marc-145细胞体外模型上的最大安全浓度(maximum no-cytotoxic concentration, MNTC)。(2)运用RT-PCR方法测定PRRSV对Marc-145细胞的侵染作用,通过免疫组化的方法观察PRRSV对Marc-145细胞的侵染部位,并研究中药化合物在其安全浓度下对病毒侵染Marc-145细胞的抑制作用效果。(3)运用细胞凋亡检测的方法研究中药化合物在其安全浓度下对PRRSV诱导细胞凋亡所起到的作用效果。结果:中药提取的天然化合物绿原酸、表告依春和淫羊藿苷均具有抗PRRSV的作用,以绿原酸最为明显。绿原酸的最大安全浓度为:500μg/mL,表告依春的最大安全浓度为:100μg/mL,淫羊藿苷的最大安全浓度为:31.25μg/mL。在最大安全浓度下添加绿原酸和表告依春,可以使得Marc-145细胞免受PRRSV的侵染,同时细胞的凋亡数量明显低于未添加药物的病毒对照组,而淫羊藿苷不能完全防止PRRSV侵染Marc-145细胞,但可以减少受病毒侵染的细胞数目,并起到一定抑制细胞凋亡的作用。结论:中药提取的天然化合物绿原酸、表告依春具有较强的体外抗PRRSV的作用,而淫羊藿苷的体外抗PRRSV的作用并不理想,推测绿原酸与表告依春的抗病毒机制可能是直接灭活PRRSV并抑制由PRRSV引起的细胞凋亡来实现,而淫羊藿苷则可以一定程度的抑制由PRRSV引起的细胞凋亡。
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