叶酸(Folic acid,FA)是一种重要的水溶性B族维生素,它可以促进细胞分裂和生长,有效治疗各种叶酸缺乏症。制备高纯度叶酸,不仅可以为叶酸的分析检测提供标准物质,也可为纯化其他具有热不稳定性和光不稳定性的物质提供参考。以叶酸粗品(95.2%)为原料,首先对结晶法纯化工艺进行研究,通过单因素实验和正交实验设计详细考察了各种因素对叶酸结晶过程的影响,结果表明两种实验设计得到的最佳条件一致,即结晶温度85℃、酸化液体积10 mL、调晶用盐酸的质量分数10%、叶酸初始浓度2.33 mg/mL、盐酸滴加速度1.0 m L/min、搅拌速度250 rpm及pH值为0.6;纯化后的叶酸纯度为98.2%;利用液相色谱-质谱联用法(LC-MS)、核磁共振波谱法(NMR)和红外光谱法(IR)对结晶产品进行了定性分析;采用LC-MS对杂质进行了分析,确定减少的主要杂质为N-(4-氨基苯甲酰)-L-谷氨酸。为得到更高纯度的叶酸,对制备型高效液相色谱法纯化叶酸进行了研究,得到最佳制备条件:流动相为乙腈-水梯度洗脱,检测波长254 nm,流速16 mL/min,上样体积2.0 mL,样品干燥方式为冷冻干燥;制备的叶酸纯度为99.4%;并利用LC-MS、NMR和IR对叶酸制备产品进行了定性分析;采用热重分析法(TGA)测定叶酸制备品中灰分杂质含量为0.0293%,电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-OES)测定无机元素杂质的含量为0.0637%,气相色谱法(GC)测定挥发性杂质,结果表明不含有挥发性杂质;研究了不同储藏条件下叶酸的短期稳定性,结果表明叶酸应储存在4℃环境中。