目的:探究BET蛋白抑制剂I-BET151在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后慢性移植物抗宿主病(cGVHD)中的作用及机制。方法:1.建立C57BL/6(H-2b)→BALB/c(H-2d)慢性移植物抗宿主病小鼠模型。2.移植后第21天将小鼠随机分成两组,分别定期注射I-BET151药物和药物溶剂;观察两组小鼠生存、体重情况并记录cGVHD评分。3.移植后第30、45、60天,取小鼠肺、肾脏、小肠、皮肤及肝脏进行HE染色,观察小鼠组织病理损伤程度。4.使用流式细胞术检测移植后第30、60天小鼠脾脏淋巴细胞比例和移植后第30天肠系膜淋巴结中淋巴细胞比例,并检测移植后45、60天小鼠胸腺细胞计数和第60天小鼠胸腺中CD3+T、CD4+T、CD8+T的比例。5.应用转录组测序技术(RNA-sequencing,RNA-seq)对移植后第60天的两组小鼠脾脏样品进行转录组测序寻找I-BET151可能作用的靶基因,并用qPCR(实时荧光定量PCR)进行验证。结果:1.I-BET151治疗能明显减轻移植后小鼠cGVHD严重程度,I-BET151组小鼠体重明显增加且cGVHD评分明显减低。2.移植后第30、45、60天I-BET151组小鼠肺、肾脏、小肠、皮肤和肝脏病理损伤较对照组明显减轻。3.移植后第30天I-BET151组小鼠脾脏中供体Th1细胞的比例较对照组明显降低,I-BET151组肠系膜淋巴结中供体CD3+T、CD8+T和树突状细胞比例明显减低;移植后第45天和第60天I-BET151组小鼠胸腺细胞绝对计数较对照组明显升高;移植后第60天,I-BET151组小鼠胸腺CD3+T的比例以及CD3+T、CD4+T和CD8+T的绝对数明显高于对照组;移植后第60天两组小鼠脾脏中CD3+T、CD4+T、调节性T细胞(Treg)、滤泡辅助T细胞(Tfh)、PD-1(程序性死亡受体1)+CD4+T细胞、滤泡调节T细胞(Tfr)、PD-1+Treg、B细胞、CD24hiCD38hi调节性B细胞(Breg)的比例无明显差异。4.通过RNA-seq技术,我们共发现711个差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),与对照组相比,I-BET151组上调基因311个,下调基因397个。GO(Gene Ontology)富集分析表明,多数差异表达的基因富集在免疫系统进程、免疫反应、免疫系统进程的调节等。KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)pathway分析结果表明,多数差异表达基因富集在造血细胞谱系、免疫系统、细胞因子-细胞因子受体相互作用等。通过查阅文献以及qPCR验证我们筛选出2个与免疫系统进程相关的DEGs:Ctnnbip1和AnxA1作为未来的研究对象。结论:小鼠allo-HSCT后应用I-BET151治疗能明显减轻cGVHD严重程度。其作用机制可能与抑制供体T细胞增殖及促进受体小鼠胸腺免疫重建有关。转录组测序结果表明I-BET151治疗后差异表达基因主要富集在免疫系统进程,与前面的结果一致,筛选出的2个差异表达基因(Ctnnbip1和AnxA1)可能是I-BET151治疗慢性移植物抗宿主病的作用靶点。