离体筛选茄子抗羟脯氨酸突变体的初步研究

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茄子(Solanum melongena L.)是一种营养丰富、风味独特和具有奇特药用价值的蔬菜,因而倍受欢迎。近年来,随着茄子消费的日益增加和茄子保护地栽培面积的扩大,对茄子保护地专用品种的需求愈来愈强烈,但是目前保护地栽培的品种耐冷、耐弱光的特性表现得还不是很突出。因而培育出能耐冷、耐弱光的保护地专用品种显得非常必要。 由于杂交品种的不断推广,导致许多地方品种的丢失,从而茄子的遗传背景逐渐变窄。目前在茄子的栽培种中尚未寻找到耐冷性强的栽培材料,故很难通过常规方法培育出耐冷的品种。采用体细胞融合、转基因技术等手段已经培育出了一些耐冷的品种,无性系变异的利用也已经在一些作物上取得成功。这种变异在植物组织培养后的再生植株中常表现得非常广泛,而且变异频率非常高。它可以发生在染色体水平上,也可以发生在分子水平上。人们利用体细胞无性系变异结合压力筛选已经培育出许多抗病、耐逆的品种。 结合本实验室条件,本项研究通过建立一套茄子离体培养技术,再进行体外选择筛选到耐冷愈伤组织,并再生成植株。其主要结果如下: 1.茄子下胚轴和子叶在添加了NAA和BA生长调节剂的MS培养基上诱导,得到了愈伤组织,但各种基因型之间的愈伤组织诱导率差异显著。BA与NAA的不同浓度组合对茄子愈伤组织的诱导有着重要的影响,其中2.0mg/L BA+0.2mg/L NAA诱导的愈伤组织较紧密,呈淡黄色至淡绿色,有利于分化。 2.不同基因型的茄子愈伤组织都可以分化出不定芽,但分化率不相同。尽管不同基因型茄子愈伤组织分化出不定芽的最佳激素组合不相同,但2.0mg/L~4.0 mg/L的BA对愈伤组织分化出不定芽起着重要的作用。另外,10mg/L AgNO3对促进不定芽的分化也起着辅助作用。 3.不定芽在添加或不添加0.2mg/L NAA的1/2MS培养基上都可以长根,2~3周后经细心移栽到花盆中,在28℃左右和高湿的条件下培养成活。 4.愈伤组织经过继代培养转接在添加不同浓度羟脯氨酸(L-Hyp)的继代培养基上。随着L-Hyp浓度的增加,愈伤组织的存活率逐渐下降。当浓度为8 mmol/L时,其存活率仅为4.3%:当进一步提高时,愈伤组织不能存活。因此以8 mmol/L的L-Hyp为筛选压力,有望筛选到抗L-Hyp的突变体。 5.用8 mmol/L的L-Hyp进行反复筛选,获得了抗性愈伤组织,并再生成植株。经耐冷性生理生化指标测定,抗性愈伤组织的脯氨酸含量与可溶性糖含量显著地高于对照,而丙二醛含量和电导百分率却显著地低于对照,从而有更好的耐冷性。再生植株的幼苗叶片脯氨酸含量显著地高于对照,而电导百分率却显著地低于对照,表现出更强的耐冷性。
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