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回药伏毛铁棒锤(Aconitum flavum Hand.-Mazz.)为毛茛科乌头属植物,以块根入药,是宁夏回族常用中草药,具有强大的镇痛、抗肿瘤、抗炎等药理作用,用于风湿性关节炎、关节痛、肿瘤等疾病的治疗。中华人民共和国药典尚未收录,目前已属于濒危的药用植物,有毒性,现代研究主要含有生物碱类成分,乌头碱是有效成分之一。 本文对伏毛铁棒锤生药学、佐剂性关节炎治疗作用进行了系统研究,并对伏毛铁棒锤β-CD包合物药效等进行了初步实验探讨,以为进一步研究其药效物质基础、建立质量标准,更合理、全面地开发利用伏毛铁棒锤药用植物资源及野生资源保护与栽培提供理论依据,并为伏毛铁棒锤新剂型的开发奠定基础。 本文主要包括以下三部分: 一、生药学研究: (一)生药鉴定:对宁夏地区具有代表性的四个产地伏毛铁棒锤根、茎、叶、果实的性状、显微、理化性质进行鉴别比较。实验结果表明:宁夏地区四个产地的伏毛铁棒锤生药鉴定,无显著差异。 (二)总生物碱含量测定:本文采用正交设计法,以总生物碱为指标,确定伏毛铁棒锤的最佳提取工艺。通过紫外分光光度法测定四个产地根、茎、叶、果实中总生物碱含量。实验结果表明:不同地质条件伏毛铁棒锤及其不同器官均含有总生物碱,含量存在差异,以六盘山伏毛铁棒锤根部总生物碱含量最高。 (三)指纹图谱的建立:建立了伏毛铁棒锤药材HPLC指纹图谱,确定了适宜的色谱条件,通过精密度、稳定性、重复性等方法学考察,表明所建立的伏毛铁棒锤指纹图谱测定方法符合中药指纹图谱建立的技术要求,可用于伏毛铁棒锤指纹图谱的测定。对不同产地伏毛铁棒锤药材进行了指纹图谱测定,标定出25个共有峰,各批药材均具有上述特征峰,但特征峰的相对含量存在差异,即各批药材指纹图谱相似度大小与其来源相关。 (四)乌头碱含量测定:以RP-HPLC法测定四个产地伏毛铁棒锤根、茎、叶及果实中乌头碱的含量。实验结果表明:不同地质条件伏毛铁棒锤及其不同器官均含有乌头碱,含量存在差异,以六盘山伏毛铁棒锤根部乌头碱含量为最高。结合上述实验,证明六盘山地区适合伏毛铁棒锤的生长。 二、佐剂性关节炎治疗作用实验研究: 以佐剂性关节炎大鼠(AA)作为实验模型,以雷公藤多苷片为阳性对照药,进行实验研究。观察大鼠足跖肿胀度、压力耐痛值、胸腺、脾脏重量指数;通过对血清相关炎性细胞因子、红细胞天然免疫指标的检测探讨伏毛铁棒锤不同给药组对AA大鼠的抗炎及免疫调节作用以及部分机理。结果表明:(1)伏毛铁棒锤高剂量给药组有明显的抗炎、镇痛、免疫调节作用,可显著抑制AA大鼠足跖肿胀及多发性关节炎,提高AA大鼠的压力耐痛值,改善AA大鼠的免疫器官指数。(2)伏毛铁棒锤通过抑制AA大鼠过高的炎性细胞因子TNF-α、IL-1β分泌、提高大鼠红细胞天然免疫功能,从而发挥抗炎和免疫调节作用。 三、伏毛铁棒锤β-CD包合物的实验研究: 通过HPLC法分析β-CD伏毛铁棒锤提取物包合前后化学成分变化,以醋酸致小鼠扭体、耳廓二甲苯致炎实验检测包合物抗炎镇痛活性。实验结果表明:(1)伏毛铁棒锤提取物包合前后,成分变化较大,表现为水溶性成分相对含量大大降低;(2)β-CD包合物仍具有较好的抗炎镇痛作用。创新点: 1、首次对伏毛铁棒锤的生药学进行了系统、全面地研究,建立了高效液相指纹图谱。 2、首次对伏毛铁棒锤佐剂性关节炎的治疗作用及其作用机制进行研究。 3、首次探讨伏毛铁棒锤β-CD包合物,将分子识别技术应用于有效成分的提取分离。