五种鼠基因组中4.5S RNA基因拷贝数的鉴定与分析

来源 :曲阜师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:xinlingbing
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啮齿动物在维系生物群落的结构和功能、生态系统物质能量流动和物种多样性等方面,起着极其重要的作用。近年来,啮齿动物对不同栖息地造成的危害日益严峻。其高繁殖力和对农区危害之大,已经引起人们越来越多的关注。4.5S RNA是一种特异存在于啮齿类细胞中丰富的核小RNA分子(small nuclear RNA, snRNA,4.5S RNA逆转座子是存在于鼠基因组中的大量短分散重复序列,在个体发育过程中处于动态变化并与衰老过程密切相关。因此对4.5SRNA的拷贝数的研究显得尤为重要重要。SYBR Green I实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术具有快速、灵敏、特异、特别是可以定量测定拷贝数的优点为检测4.5SRNA基因提供了很好的方法。本研究分别以黑线仓鼠(Cricetulus barabensis)黑线姬鼠,大仓鼠,大家鼠,小家鼠为材料,从新鲜肝脏中提取总RNA,用合成的引物反转录合成cDNA,用该cDNA为模板PCR扩增4.5SRNA的基因相应的cDNA片段,将其与PMD-18相连,得到重组质粒,鉴定测序。将重组质粒纯化后作为标准品质粒,将标准品倍比稀释,,选取小鼠的高度保守基因GAPDH为内参,利用绝对定量的实时荧光PCR法鉴定几种鼠鼠拷贝数,结果表明结果表明,该方法具有线性关系好,特异性、敏感性、重复性高等特点,通过应用荧光定量PCR法测得4.5SRNA在小家鼠,大家鼠,黑线仓鼠,黑线姬鼠,大仓鼠的基因组中的拷贝数分别是:2570,1096,1513,1770,954。该实验进一步证实了4.5SRNA你转座子在部分动物基因组中存在的事实,更进一步说明了研究逆转座子的生物学意义。关于4.5SRNA你转座子为什么仅存在于动物基因组中,是如何进化的,以及其在细胞生命代谢中还有哪些功能等问题,尚待进一步探讨。
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