目的:通过构建小鼠来源神经瘤母细胞(Mouse neuroblastoma N2a cells;N2a cells)的氧糖剥夺/复氧模型(OGD/R),验证micro RNA-29b(Mir-29b)对N2a细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,同时对其潜在的保护机制进行探讨。验证IV型胶原蛋白基因a1(a1 type IV collagen;COL4A1)为mir-29b的靶点基因。通过对N2a细胞OQD/R模型的建立,验证mir-29b是通过靶向调控COL4A1的表达,对N2a细胞OGD/R损伤起到保护作用。方法:分别在正常细胞培养环境及氧糖剥夺/复氧环境中培养N2a细胞,q PCR检测两种不同环境中培养的N2a细胞mir-29b的表达。培养N2a细胞,将所培养的细胞根据不同处理分为三组,分别为:未给予干预组(H/R)、给予mir-29b mimics干预阴性对照组(H/R mimics NC)、mir-29b mimimics干预组(H/R mimimics),以CCK8、细胞克隆形成检测细胞的增殖,以Hoechst、流式细胞术检测细胞的凋亡情况,用Western Blot检测两组细胞中凋亡相关蛋白的表达。按照常规的方法使用脂质体法将合成的mir-29b载体及其对照转染入N2a细胞,分为:未转染的正常培养细胞组(NC)、转染mir-29b对照组(mir-29b mimics NC)、转染mir-29b组(mir-29b mimics),以q PCR检测三组不同处理细胞的COL4A1的表达量。构建COL4A1的野生和突变载体,双荧光素酶验证靶基因。设计合成COL4A1载体,将合成的COL4A1转染N2a细胞,分为未转染组(NC)、转染COL4A1突变型载体组(COL4A1 NC)、转染COL4A1野生型载体组(COL4A1),CCK8、克隆形成检测以上三组细胞的增殖,Hoechst、流式细胞术检测以上三组细胞的凋亡,Western Blot检测以上三组细胞中凋亡相关蛋白的表达。结果:缺氧/复氧培养的N2a细胞中mir-29b的表达较正常培养的N2a细胞降低,上调mir-29b后,细胞的增殖能力明显增强,细胞的凋亡明显受到抑制。在上调mir-29b后,细胞中的COL4A1表达受到抑制;而在转染COL4A1及其对照后,COL4A1对照组的细胞增殖较过表达组细胞明显增加,COL4A1对照组的细胞凋亡较过表达组细胞降低。结论:Mir-29b可以通过调控COL4A1的表达对N2a神经细胞缺血/再灌注损伤起到保护作用。