本课题从整体动物到细胞水平，对心脏5-HT含量及受体分布、心肌细胞内信号转导过程及电生理作用进行了较为系统地研究，探讨5-HT与心肌肥厚发病的关系。1．实验性心肌肥厚与心肌5-羟色胺含量的相关性 采用腹主动脉缩窄和ip甲状腺素建立压力超负荷和体液性心肌肥厚模型；观察大鼠发生心肌肥厚时心肌组织中5-HT含量的变化，探讨5-HT与心肌肥厚发生的关系。结果发现，大鼠腹主动脉缩窄后8周，心肌肥厚明显，发现心肌肥厚程度与心肌组织中5-HT含量呈正相关。腹腔注射甲状腺素2周后出现心肌肥厚，4周时加剧；于2、3、4周时处死动物，发现肥厚心肌组织中5-HT含量显著增加，也呈正相关。本研究结果提示5-HT与心肌肥厚的形成中有关。2．外源性5-HT对心肌细胞5-HT受体表达的促进作用 采用细胞免疫组织化学方法观察培养乳鼠心室肌细胞5-HT受体表达及外源性5-HT对其表达的影响。结果发现，大鼠心室肌细胞膜上有5-HT受体分布，光镜下可见5-HT受体免疫阳性反应为棕黄色，均匀分布心肌细胞膜上。在培养基中加入5-HT(10μmol.L^-1)，继续培养48h后，可见心肌细胞免疫阳性加重，棕黄色加深，提示外源性 第四军医大学博士学位论文5卫T可促进其表达。3．5－羟色胺升高心肌细胞内游离钙浓度的实验观察 采用培养的乳鼠心肌细胞，激光共聚焦显微镜观察5－HT对细胞内游离Carers度的影响，并探讨其作用机制。结果发现5－HT在lpm1．L－‘欠10 pm。1．r‘和100Hm1．L－‘时均可升高，巳腑离CJ浓度，此作用随剂量增加而加强：二氢毗睫类钙通道阻断剂1—Zdipine可部分桔抗 5．HT的作用；与此相似，yanodin （ 0 u mol工“’）时可部分桔抗5．HT的作用；用EGTA络合细胞外液中游离Ca2＋，5－HT升高心肌游离叨”作用明显减弱；进一步的研究发现，SHT二型受体 6－HTZR)阻断剂赛庚定可显著抑制5．HT升高。L’肌游离Ca2＋。可见5－HT升高，心肌游离Ca2＋的作用与细胞外Ca2＋经5卫 或二氢毗睫类钙通道进入细胞以及肌浆网内钙释放有关。4．5．HT对心肌细胞增殖及蛋白激酶C活性的影响 采用培养的乳鼠心肌细胞，观察5－r对大鼠心肌细胞蛋白质和DNA合成及 pKC活性的影响。结果表明，5．f在 ill pl工－’、＊u mol．L‘和 100 u mol．L‘时均显著促进。L’肌细胞蛋白质和 DNA合成及。L’脏成纤维细胞增殖，以 10 u mol．L－‘剂量时作用最强。5－HT在 1umd．L－‘和10 p＿LL“‘剂量时可加强心肌细胞PKC活性，并促使PKC从胞浆移位到细胞膜，5－H几受体桔抗剂nanserin可逆转此作用。结果提示5－HT参与心肌肥厚的发生发展过程，可能通过心肌细胞5H 受体激活PKC活性，促使PKC从胞浆移位到细胞膜，促进心肌细胞总蛋白和DNA合成。5．5－羟色胺增强去甲肾上腺素诱导的肥厚心肌L－型钙电流 大鼠腹腔注射NE复制心肌肥厚模型，酶解分离单个心室肌细胞，全细胞膜片籍法研究5－HT对M诱导的大鼠肥厚心肌L－型钙电 －4－ 第四军医大学博士学位论文流（b）的影响。结果表明：（）肥厚心肌细胞IC。与正常心肌细胞相卜，明显增加（0 mV时分另为 4．5上 0．5 pA／F和 3．SIO．3哟F，P＜0．01）。（2）5－HT可显著增加肥厚和正常心肌细胞 b，并使最大激活电流从omV左移至－1 OInV0InV：此外，5－叮增加b作用在肥厚心肌细胞更为显著。可见5－HT促进卜型钙通道激活而显著增加正常及肥厚心肌细胞＊，此作用在肥厚。乙肌细胞更显著。6．5－Ifl’对正常和心肌肥厚大鼠心室肌细胞ItO的影响 采用全细胞膜片瓣，观察5－HT对大鼠心室肌细胞Ito的影响及其机制。结果可见：（）肥厚心肌Io与正常细胞Io相比，无明显变化；Q)在正常大鼠心肌细胞，illmOI．厂‘和 10 11ml．厂‘的 5－HT可使70mV时的Io分别降低28．0％和36刀％；在肥厚，L’肌细胞，使Io幅度分别陶氏30厂％和43．3％，Io降低幅度较正常心肌细胞为大，但无统计学差异（P＞0刀5）；（3）5－HT。R特异性阻断剂ianserin （101mol工－‘）可显著对抗 5．HT （ 0 u mol．L‘）降低 Ito的作用；而另一个5十T。R阻断剂 Cyp… （ 0 u mol．L－‘）却表现出相反的作用，cyprohepee与5JI’－’合用时，可显著加强5－HT的作用，使Io进一步降低，失活加快；而单独应用CvDrO忧加讪皿时，显著增加心肌细胞L的作用；N)P肛强效激动剂P帆门——LL－‘)可显著加强5－HT抑制 Io的作用，在＋70mV时抑制率增加 30．8％；而PKC抑制剂CHE （lthe．厂’）则表现出部分对抗SHT抑制It。的作用，使Io幅度在＋70mV时恢复13＊％：（5）PLC抑帘剂COmpOUnd 48／80 （1。g．ml”’）可显著对抗 5－HT抑制 Io的作用，使 Io幅度在＋70InV时恢复27％。结果提示，5－HT抑制ItD机制为激活