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第一部分ERK、P13K信号通路在胶质母细胞瘤中诱导Nrf2激活并通过Nrf2调节细胞的存活目的：细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase, PI3K)信号通路在人脑胶质母细胞瘤中的异常激活导致其下游的大量转录因子失调。研究表明,部分类型肿瘤细胞中核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2-related factor2, Nrf2)的高度表达能促进肿瘤的恶性进展。本实验主要探讨胶质母细胞瘤中ERK和P13K信号通路对Nfrf2-ARE信号通路的是否有调节作用。方法：1、收集16位胶质母细胞瘤患者的肿瘤标本和瘤旁正常组织的标本进行免疫组织化学染色,分析Nrf2在胶质母细胞瘤中的表达和分布情况。2、在体外,用ERK抑制剂(PD9805950u M)和P13K抑制剂(LY29400210μM)处理人胶质母细胞瘤细胞系3小时来抑制ERK和P13K信号通路的活化。应用免疫荧光染色观察联合抑制ERK和P13K信号通路对胶质母细胞瘤细胞系(SHG44, U87和U251)中Nrf2表达分布的影响。根据免疫荧光实验的结果选用U251细胞系进行深入研究。应用western blot分析联合抑制ERK和P13K信号通路对U251胞核胞浆中Nrf2蛋白表达的影响,且分别分析每条通路对Nrf2蛋白的影响。应用Real-time PCR分析联合抑制ERK和P13K信号通路对U251细胞中Nrf2及其激活的下游基因HO-1和NQO-1的mRNA水平的影响。3、通过瞬时转染分别上调、下调Nrf2的表达。利用MTT实验分析Nrf2对U251细胞活性的影响,以及抑制ERK和P13K信号通路后补救性地上调Nrf2对细胞活性的影响。结果：1、人胶质母细胞瘤标本中的Nrf2表达和核定位增高。2、联合抑制ERK和P13K信号通路抑制胶质母细胞瘤细胞系中Nrf2的表达和转录激活。3、ERK和P13K信号通路调节胶质瘤细胞系U251的细胞活性部分通过Nrf2途径实现。结论：ERK和P13K信号通路调节胶质母细胞瘤中Nrf2的表达和转录激活,且部分通过Nrf2信号通路来调控肿瘤细胞的活性。第二部分在胶质母细胞瘤中替莫唑胺联合放射治疗激活Nrf2产生放化疗抵抗目的：放化疗抵抗是成功治疗胶质母细胞瘤的一个主要的障碍。近年来,有文献报道Nrf2激活能增加多种肿瘤细胞的放化疗抵抗。本实验主要研究在胶质母细胞瘤中替莫唑胺(Temozolomide, TMZ)加放射(Irradiation, IR)治疗能否激活Nrf2-ARE信号通路,并对该通路对放化疗抵抗的影响做初步研究。方法：1、选取14位经历不同术后治疗的胶质母细胞瘤患者,包括未经术后治疗(n=4)、IR治疗(n=5)和TMZ加IR(n=5)治疗。采用免疫组织化学染色检测TMZ和IR对Nrf2蛋白表达和分布的影响。2、在体外实验中,采用免疫细胞化学染色检测TMZ加IR治疗对胶质母细胞瘤细胞系(A172、U87、U251)中Nrf2分布的影响。采用Western Blot检测TMZ加IR治疗对U251细胞中Nrf2蛋白的核积累情况,采用Real-time PCR检测Nrf2下游基因的表达情况。3、采用CCK8检测下调Nrf2表达对TMZ加IR诱导的肿瘤细胞死亡的影响。结果：1、临床标本的Nrf2免疫组织化学染色证明TMZ加IR治疗能增加Nrf2蛋白的表达和核积累。2、TMZ加IR治疗能增加人胶质母细胞瘤细胞系(A172、U87、U251)中Nrf2的核内分布。TMZ加IR治疗能增加U251细胞中Nrf2蛋白的核积累并且诱导Nrf2下游基因的表达。3、下调Nrf2表达能增加TMZ加IR治疗诱导的肿瘤细胞死亡。结论：这些结果证明TMZ加IR治疗能诱导人胶质母细胞瘤中Nrf2激活,Nrf2的激活可能与胶质母细胞瘤的放化疗耐受相关。阻断Nrf2的激活可能提高胶质母细胞瘤的放化疗效果。