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研究背景:季节性流感及流感大流行对人体健康及全球经济造成了严重的威胁。目前临床上的抗流感病毒药物主要是靶向病毒蛋白,如M2离子通道阻滞剂(如金刚烷胺)和神经氨酸苷酶抑制剂(如奥司他韦),但已出现了对这些药物耐药的病毒毒株,故急需寻找新的抗病毒靶点。由于流感病毒感染细胞需要大量的宿主因子的协助,对病毒生长至关重要的宿主因子便成为了潜在的药物靶标。流感病毒进入宿主细胞是感染的第一步,抑制流感病毒进入靶细胞可有效地阻断病毒传播。除了靶向对进入必需的病毒蛋白(如血凝素蛋白HA)之外,还可以靶向协助病毒进入的宿主蛋白。通过查阅文献发现,SNX10主要分布在内体膜上,能与v-ATPase相互作用,激活质子泵,在细胞内形成巨大的酸性空泡。此外,v-ATPase是细胞中主要的质子泵,其介导的内体酸化是病毒进入细胞的必需过程。由于SNX10调节空泡酸化过程与流感病毒诱导的内体酸化过程相似,我们推测流感病毒感染后,SNX10可能通过与v-ATPase相互作用参与内体的酸化,从而参与病毒的进入。重要的是,由于许多病毒使用相似的进入途径,靶向抑制SNX10可能可以开发出新的广谱抗病毒药物。研究目的:本课题选用SNX10为研究对象,探究SNX10对流感病毒感染的调控作用,并进一步阐明其作用机制,致力于寻找宿主因子以对抗流感病毒,为寻找新的抗病毒靶点提供依据和思路。实验方法:1.RT-PCR、Western blotting、CHX蛋白合成抑制实验、MG-132蛋白酶体抑制实验、泛素化实验检测流感病毒感染后SNX10蛋白在细胞内的调控。2.RNAi实验、过表达实验、空斑形成实验和间接免疫荧光实验检测SNX10对流感病毒感染的调控作用。3.中性红染色、Lysotrackerred染色、免疫共聚焦实验、免疫荧光共定位实验研究SNX10对流感病毒感染的调控作用机制。实验结果:1.流感病毒感染细胞或Poly(I:C)处理细胞后,细胞内SNX10的表达上调;流感病毒感染后,SNXI0mRNA表达没有显著变化,但SNX10在细胞内的泛素化水平下调。2.细胞沉默SNX10后,流感病毒NP蛋白的表达降低,子代释放水平减少;相反地,外源性过表达SNX10后,流感病毒NP蛋白的表达上调,子代释放水平增加。3.细胞沉默SNX10后,细胞核内NP蛋白的表达减少;而外源性过表达SNX10后,核内NP蛋白的表达增加。4.外源性过表达SNX10后,细胞内形成空泡,且SNX10可与v-ATPase结合诱导空泡酸化。5.流感病毒感染诱导细胞产生酸性内体,SNX10与流感病毒刺激形成的酸性内体发生共定位,敲低SNX10后可抑制流感病毒诱导的酸性内体的产生。结论:1.流感病毒感染细胞后,可通过抑制SNX10的泛素化降解,稳定细胞内SNX10蛋白的表达水平,保证流感病毒的复制。2.SNX10对流感病毒的感染具有调控作用。3.SNX10影响流感病毒感染的早期阶段。4.SNX10可诱导细胞形成酸性空泡。5.SNX10参与形成流感病毒进入宿主细胞所诱导的内体酸化。