【摘 要】
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细胞长期低温冷冻保存意义重大。冷冻和复苏过程中,细胞内外结冰产生的渗透压损伤和冰晶损伤是导致细胞死亡的主要因素,且细菌感染风险也不容忽视。为了制备出兼具生物相容性、生物降解性、抗冻和抗菌的低温冷冻保存体系,本文以功能性聚肽合成及其细胞低温保护为研究对象,重点研究了功能性聚肽抗菌、膜扰动活性和红细胞抗冻。内容主要包括聚(赖氨酸-co-缬氨酸)合成及抗菌性能;疏水氨基酸改性聚天冬氨酸及膜扰动活性;疏水
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细胞长期低温冷冻保存意义重大。冷冻和复苏过程中,细胞内外结冰产生的渗透压损伤和冰晶损伤是导致细胞死亡的主要因素,且细菌感染风险也不容忽视。为了制备出兼具生物相容性、生物降解性、抗冻和抗菌的低温冷冻保存体系,本文以功能性聚肽合成及其细胞低温保护为研究对象,重点研究了功能性聚肽抗菌、膜扰动活性和红细胞抗冻。内容主要包括聚(赖氨酸-co-缬氨酸)合成及抗菌性能;疏水氨基酸改性聚天冬氨酸及膜扰动活性;疏水氨基酸及海藻糖改性聚赖氨酸、海藻糖改性聚乙二醇-b-[(赖氨酸-co-天冬氨酸)-co/b-苯丙氨酸]及其协同海藻糖用于绵羊红细胞(RBCs)低温冷冻保存。端氨基倍半硅氧烷和异丁胺引发苄氧羰基-赖氨酸-羧基环内酸酐和缬氨酸-羧基环内酸酐开环聚合合成了聚(赖氨酸-co-缬氨酸)聚肽,随后制备了聚ε-己内酯(PCL)/聚肽电纺纤维。聚(赖氨酸-co-缬氨酸)对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌皆有较好的抗菌性能。当聚肽掺杂量为8%时,PCL/聚肽电纺纤维膜对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有抑菌作用,生物相容性好。天然聚天冬氨酸依次接枝苯丙氨酸和苄氧羰基赖氨酸,制备了(聚天冬氨酸-g-苯丙氨酸)-g-苄氧羰基赖氨酸(PFK)。在p H为7.4时,接枝多个疏水氨基酸的PFK可局部扰乱细胞膜,PFK在其浓度低于0.3 mg·m L-1时,可促进钙黄绿素模型进入细胞,生物相容性好。?-聚赖氨酸(?-PL)依次接枝对甲苯磺酰基-精氨酸和羧基化海藻糖,合成了聚赖氨酸-g-对甲苯酰基-精氨酸-g-海藻糖糖肽(PLR8T13)。PLR8T13生物相容性好,1.0 mg·m L-1的PLR8T13与40.0μg·m L-1?-PL复合,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌皆具有良好抗菌作用,也具有RBCs低温保护作用;PLR8T13吸附细胞膜表面稳定细胞膜,并协同海藻糖抑制冰再结晶,低温冷冻RBCs的存活率为75.0±2.4%。端氨基聚乙二醇(PEG-NH2)引发赖氨酸-羧基环内酸酐、天冬氨酸-羧基环内酸酐和苯丙氨酸-羧基环内酸酐开环聚合制备了PEG-b-聚(赖氨酸-天冬氨酸)-苯丙氨酸,并合成了PEG-b-聚(赖氨酸-天冬氨酸)-苯丙氨酸-g-海藻糖(PKDFT)。PKDFT生物相容性好,PKDFT与海藻糖协同低温保护RBCs时,存活率可达87.4±0.3%。
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