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为进一步了解放线菌Tlll菌株的拮抗作用方式,以黄瓜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum为指示菌测定了该菌株发酵液的抑菌活性,优化了发酵条件,并对发酵液进行了抗菌谱测定、理化性质分析,从而为进一步生防应用打下基础。
1、通过形态观察、生理生化测定结合16S rDNA序列分析确定了其分类地位,结果表明,Tlll与黄色链霉菌Streptomyces flavus strainNBRC3359(AB184749)序列的同源性最高,初步鉴定为黄色链霉菌(Streptomyces flavus)。
2、为明确放线菌Tlll的理化性质,研究了其抗菌谱,及贮存时间、温度、酸碱条件、紫外光照射等对其发酵液稳定性的影响。结果表明,Tlll发酵液对黄瓜菌核、黄瓜蔓枯、棉花红腐病菌等有较高的抑制活性;贮存稳定性和热稳定性良好,4℃贮存60d抑菌活性为对照的88.3%,80℃处理60min抑菌活性为对照的90.9%;对pH值较敏感,在pH5~7时活性较高;对紫外线稳定,紫外光照射12h,其活性基本不受影响。.
3、为提高Tlll发酵液的抑菌能力,采用单因素和正交试验设计法对Tlll发酵培养基的组成及发酵条件进行了优化。结果表明,最佳发酵培养基组成为:可溶性淀粉5g,大豆蛋白胨5g,NaNO320g,FeSO42.5g,去离子水1000mL;最佳发酵条件为:发酵温度27℃,发酵时间5d,初始pH6.0,接种量5%,装液量75mL/250mL,摇床转速150r·min-1。采用优化培养基及上述优化条件培养的Tlll发酵液,其抑菌率稳定在83%以上。
4、初步研究了Tlll发酵产物对黄瓜菌核病菌的作用方式,采用菌丝生长速率法测定了其对黄瓜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum菌丝生长的毒力,及其对菌丝形态、菌核形成、菌核萌发和菌体细胞膜透性的影响。结果表明,Tlll发酵产物对黄瓜菌核病菌菌丝生长的EC50值为12.5μg/mL,低于对照药剂乙霉威及嘧霉胺;经发酵产物处理后,菌丝形态出现黄化、畸形等现象,但尚未发现细胞质外渗;菌核形成的时间有所延长,数量有所减少,且重量略有降低;在发酵产物浓度为250μg/mL时不能完全抑制菌核萌发;对菌体细胞膜渗透势的影响不大。