红花玉兰黄酮类物质的提取纯化及活性研究

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红花玉兰(Magnolia wufengensis L.Y.Ma et L.R.Wang)是木兰科木兰属玉兰亚属的花卉新种。作为一种观赏花木,花期过后,绝大部分花瓣未能得到有效加工利用,造成资源浪费,因此加快红花玉兰的研究具有重要意义。截至现在,国内外针对红花玉兰的研究尚不全面,主要集中在生理特性、遗传育种等方面,对红花玉兰黄酮类物质的相关研究未有报道。黄酮类物质是广泛存在于自然界中的一类植物次生代谢产物,具有抗氧化、降血糖、消炎、抑菌等多种生理效用。针对以上现状,本课题系统研究红花玉兰黄酮类物质的提取工艺、分离纯化、生理活性及组分鉴定,并以白玉兰为参照。旨在获得纯度较高、活性较强的红花玉兰黄酮类物质,使农林废弃物变废为宝,为红花玉兰的综合利用提供技术支持。主要研究结论如下:(1)超声波辅助提取红花玉兰黄酮类物质的最佳参数为:超声温度69℃,超声时间40 min,乙醇浓度56%,液料比60 m L/g,在此条件下,红花玉兰黄酮类物质实际提取率为13.91%,是最优提取条件下白玉兰黄酮类物质提取率的2.7倍。(2)AB-8大孔树脂分离纯化红花玉兰黄酮类物质,以白玉兰为参照,通过考察静态和动态吸附解吸条件进而确定最佳纯化工艺为:上样液黄酮类物质浓度0.81mg/m L,p H值2.0,上样流速1.5 BV/h,后用8 BV去离子水洗去杂质,水洗流速4.5BV/h,最后用80%乙醇作为洗脱剂并以4.5 BV/h流速洗脱。在此条件下,红花玉兰黄酮类物质纯度由25.67%上升到73.80%,白玉兰黄酮类物质纯度由10.18%上升到51.35%。结果表明AB-8大孔树脂对红花玉兰、白玉兰黄酮类物质具有良好的纯化效果。(3)相较于黄酮类粗提物,纯化物有着更好的抗氧化活性。当浓度为0.12 mg/m L时,红花玉兰黄酮类纯化物对DPPH自由基、ABTS自由基清除率分别为92.46%、81.86%,总还原能力也随着纯度的提高而增强。1.2 mg/m L的红花玉兰黄酮类纯化物对α-葡萄糖苷酶抑制率为82.64%,最为接近阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率89.70%。1.2 mg/m L的红花玉兰黄酮类纯化物对晚期糖基化终末产物(Advancced Glycation End products,AGEs)抑制率分别为45.52%(BSA-Glu体系)和65.74%(BSAMGO体系),对乙酰胆碱酯酶的抑制率为57.22%,均明显强于同浓度的白玉兰黄酮类纯化物。表明红花玉兰黄酮类物质有着更显著的体外降血糖活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性。(4)利用HPLC-MS分别对红花玉兰、白玉兰黄酮类物质进行组分鉴定。研究发现,两种玉兰都含有槲皮素-3-葡萄糖苷、芦丁,但红花玉兰含有更丰富的花青素类黄酮物质,如芍药色素、飞燕草素、矢车菊素、牵牛花色素,而白玉兰中未检测到此类物质。关联活性研究章节,推测红花玉兰黄酮类物质更为突出的体外降血糖活性和乙酰胆碱酯酶抑制活性与花青素的含量与种类有关。
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