论文部分内容阅读
拓扑学研究揭示DsbD蛋白由三个结构域组成:N端周质空问结构域(αdomain)和C端的周质空间结构域(γdomain)以及八个跨膜的疏水核心(βdomain)。对Xcc8004中的DsbD蛋白进行研究,在前期的研究中发现,DsbD蛋白在c型细胞色素合成的代谢途径中起着非常重要的作用,它是c型细胞色素合成的必经途径,同时参与蛋白质二硫键的形成。为了研究该蛋白的生物学活性,本研究对DsbD蛋白的γdomain以及βdomain进行表达,从而研究它们的生物学活性,结果显示单独的γdomain并无氧化还原活性,βdomain的反应催化速率也较其他硫氧还蛋白的催化速率要慢,因此推测DsbD蛋白要行使其正常生物功能,需要三个结构域的存在。十字花科黑腐病菌(Xanthomonascampestrispv.campestris)Xcc8004中的DsbD蛋白由XC0531编码,与其上游基因XC0532相隔5个碱基对,对于两个基因的关系还不清楚,因此还要对XC0532进行研究。根据基因组的注释,Xcc8004基因组中编号为XC0532的基因有可能编码二价阳离子耐受蛋白,为了进一步了解XC0532的功能,本研究构建了该基因的整合突变体和缺失突变体,并对突变体进行分析。通过致病性分析和表型分析,发现该基因对EPS的合成及致病性无明显影响,但是该基因的极性突变体的EPS产量与致病力较野生型有所下降,后通过RT-PCR证实XC0531和XC0532有共转录的关系。在二价离子耐受性实验中发现,XC0532突变后,菌株对Mn2+、Ni2+、Cu2+、Cd2+、Zn2+等离子呈现敏感,但是并非对所有的二价离子都敏感,例如对Ca2+等的敏感性与野生型相似,同时还检测了突变体对EGTA的敏感度,目的是检测该基因与二价阳离子以外的物质有无关系,结果显示突变体对EGTA的敏感度与野生型一致。当然XC0532是否与其他的物质也无耐受关系还不能确定,XC0532基因及其编码的蛋白还有待进一步的研究。