【摘 要】
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目的建立快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的二重实时聚合酶链反应(duplex real-time PCR),并将其用于检测金黄色葡萄球菌临床分离株中MRSA。方法采用二重SYBR Green
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目的建立快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的二重实时聚合酶链反应(duplex real-time PCR),并将其用于检测金黄色葡萄球菌临床分离株中MRSA。方法采用二重SYBR Green实时PCR快速检测MRSA的决定基因mecA和金黄色葡萄球菌的种特异性基因nuc,经熔解曲线分析鉴定产物。同时采用琼脂稀释法分别测定头孢西丁、苯唑西林对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC),并将表型试验与基因型测定结果进行比较。结果在二重SYBR Green实时PCR中,所有MRSA菌株的熔解曲线均呈现mecA、nuc基因特异性的峰,甲氧西林敏感的金葡菌仅有nuc峰,耐甲氧西林的表皮葡萄球菌仅有mecA峰,甲氧西林敏感的表葡菌与其他菌种的菌株无特异峰出现;当MRSA菌浓度达102cfu/mL时就可检出。在131株临床金黄色葡萄球菌分离株中,二重实时PCR扩增mecA基因29.01%(38/131)阳性,nuc基因100%阳性。单引物与二重实时PCR两者阳性扩增符合率为100%。琼脂稀释法测定131株临床分离的金黄色葡萄球菌对头孢西丁的耐药性:耐药40株,中介3株,敏感88株,耐药率为30.53%;对苯唑西林的耐药性:耐药45株,敏感86株,耐药率为34.35%。以基因型测定结果为金标准,头孢西丁MIC法的灵敏度为94.7%,特异度为93.5%,阳性预测值为90.0%,阳性似然比为14.57;苯唑西林MIC法的灵敏度为92.1%,特异度为89.2%,阳性预测值为77.8%,阳性似然比为8.53。结论针对mecA、nuc基因的二重实时PCR能准确、快速地鉴定耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性的葡萄球菌。
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