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第一部分P53- saRNA对激素非依赖前列腺癌细胞DU-145影响的试验研究目的：探讨合成的P53 saRNA对DU-145细胞p53表达的影响及其对细胞凋亡、细胞周期的影响。方法：根据文献报道设计并合成靶向P53-285的小双链RNA作为P53saRNA,同时合成一阴性对照系列作为控制RNA；利用脂质体法采用lipofectamineTM2000将ds-RNA转染入前列腺癌细胞系DU-145细胞中；转染72小时后收集细胞,采用RT-PCR检测P53 mRNA,采用western-blot检测p53蛋白的表达变化；同时采用AnnexinV-PI染色法和PI染色法,使用流式细胞仪分析其对它们凋亡和细胞周期的影响。结果：P53 saRNA能使DU-145细胞P53 mRNA表达增加但p53蛋白表达增加不明显；P53 saRNA对DU-145细胞凋亡、细胞周期均无明显影响。结论：P53 -saRNA能激活变异型p53 mRNA表达,但不能诱导其自身凋亡。说明saRNA能否激活其靶基因的表达与靶基因变异有关,也从侧面说明变异型前列腺癌细胞p53表达升高可能是其自身micro-RNAs表达谱变化的结果。第二部分P53 saRNA载体的构建及鉴定目的：探索Si-RNA载体表达法原理是否适用于Sa-RNA载体构建,并构建携带靶向P53基因Sa-RNA的真核表达载体。方法：根据P53-285序列及shRNA设计原则,设计并合成一对寡聚单链DNA,克隆至pENTRTM/U6载体的黏性末端,连接产物转化到感受态细胞E. coliDH5a中,通过扩增后提取质粒DNA测序分析；同时观察常见前列腺癌细胞系细胞转染该质粒72小时后其P53表达变化。结果：经DNA测序证实成功构建带有U6启动子的P53-sa-RNA真核表达载体；Du-145细胞转染72小时后,RT-PCR证实P53表达上调。结论：成功构建pENTR/U6-P53- saRNA质粒,证明了载体表达法也适用于构建sa-RNA表达质粒。第三部分P53 saRNA联合CP-31398对激素非依赖前列腺癌细胞DU-145影响的试验研究目的：探讨P53 -saRNA联合CP-31398对DU-145细胞p53及其下游基因p21表达的影响及其对细胞凋亡、细胞周期的影响。方法：P53- saRNA转染DU-145细胞后72小时,加入CP-31398(浓度为2μg/ml)治疗24小时,收集细胞；采用MTT细胞活力试验测定细胞活力变化及抑制率；AnnexinV-PI染色法和PI染色法,使用流式细胞仪分析其对它们凋亡和细胞周期的影响；采用RT-PCR检测P53基因下游基因P21mRNA表达变化。结果：与单用P53- saRNA转染及单用CP-31398治疗相比,二者联合应用能明显抑制DU-145细胞活力,促进其凋亡,将细胞周期阻滞于s期。经RT-PCR证实其增加凋亡,阻滞细胞周期是通过激活p53网络。结论：P53- saRNA联合CP-31398可用来诱导DU-145细胞凋亡,也许可成为治疗激素非依赖性前列腺癌的工具。