非妊娠状态下,子宫内膜受雌、孕激素的共同调节,发生周期性增殖、分化,崩解脱落随后再生修复的规律性变化。这种周期性的崩解脱落和再生修复,即月经（Menstruation）,不断更新了子宫内膜,对女性的生殖健康意义重大。本论文主要通过建立野生型（Wild Type,WT）和敲除型（Knock Out,KO）小鼠月经样模型,探讨激活转录因子6（Activating Transcription Factor 6,ATF6）对子宫内膜生理修复的作用及机制。主要包括三个方面:ATF6在人子宫内膜月经周期和小鼠月经样模型子宫中的表达水平、ATF6敲除对小鼠月经样模型子宫内膜生理修复进程的影响以及ATF6下游调控机制的初步研究。1.ATF6在人月经周期子宫内膜和小鼠月经样模型子宫中的表达。免疫组织化学染色发现,人子宫内膜ATF6在月经期和增殖早期的表达水平较高。随后建立小鼠假孕月经样模型,取材Day 6、Day 7,以及孕酮撤退24 h、32 h、40 h和48 h的子宫组织。大体和HE染色显示,Day 6和Day 7的子宫内膜处于蜕膜化状态;孕酮撤退24h的子宫内膜完全崩解,24～48h的子宫内膜处于生理修复进程。免疫组织化学染色结果、qRT-PCR结果以及细胞核蛋白和细胞质蛋白的Western blot结果显示,ATF6在小鼠月经样模型子宫40～48 h的表达水平显著升高。这提示ATF6在子宫内膜生理修复具有重要作用。2.ATF6对小鼠假孕月经样模型子宫内膜生理修复进程的影响。首先,通过RT-PCR和DNA电泳、DNA测序和Western blot鉴定KO鼠的基因型,然后初步评估转基因鼠的繁殖能力。其次,建立WT和KO小鼠假孕月经样模型,分别取材Day 6、Day 7的子宫组织,通过HE染色、PRL免疫组化染色等技术判断ATF6对蜕膜化的影响。然后在孕酮撤退后24 h、32 h、40 h和48 h取材子宫组织。对比两组子宫的大体、HE染色,以及Ki67和CK17免疫组织化学染色、Western blot等结果发现,敲除ATF6对子宫内膜蜕膜化、崩解无影响;但明显延迟了子宫内膜的生理修复进程,在40 h的生理修复延迟表型差异最为明显。3.ATF6下游基因的筛选和验证。选择40 h的子宫冰冻样本,进行表达谱基因芯片检测,通过差异下调基因的GO富集分析、KEGG富集分析、Atf6靶基因的从头预测和PPI网络分析,筛选出下游基因并验证。24h～48h子宫组织的qRT-PCR结果以及Western blot结果显示,两组子宫的CXCR2和MMP9mRNA和蛋白的表达水平均在40 h时显著升高,与ATF6的变化趋势一致;且敲除ATF6降低了 CXCR2和MMP9mRNA和蛋白的表达水平。提示ATF6可能通过激活炎性因子CXCR2和MMP9,进而促进子宫内膜的生理修复。最后在HESCs细胞水平验证ATF6的调控作用以及对细胞增殖和迁移的影响。通过siRNA-lipo3 000/质粒-lipo3 000 敲降/过表达 HESCs 的 ATF6,利用 qRT-PCR 和 Western blot 技术,验证敲降/过表达的效果。结果显示,CXCR2和MMP9 mRNA和蛋白的表达水平高/低与ATF6的升高/降低紧密相关。细胞增殖实验和迁移实验结果显示,敲降ATF6显著抑制HESCs的增殖和迁移,但过表达并未影响这一现象。综上,ATF6可能正向调控炎症相关基因CXCR2和MMP9,促进影响基质细胞的增殖和迁移,进而促进子宫内膜再生修复。