B淋巴细胞诱发的体液免疫在乙肝病毒清除中的重要作用已经成为共识。而初始B细胞作为一种APC，尤其是在诱导CD8+T细胞免疫应答中的作用仍然存在争议。初始B细胞不能诱导CD8+T细胞对抗原的应答至少部分是由于自身相对较低的共刺激分子表达造成的，因为初始B细胞的共刺激分子表达可能增加其APC功能。B细胞APC活性的另一个重大缺陷在于有特定抗原受体的初始B细胞的数量很少，造成抗原识别和受体介导的摄入也非常少。因此，要通过B细胞表面特定的受体介导特异性抗原摄入并诱发免疫应答的确存在困难。越来越多的研究已经证实B细胞完全具备作为抗原提呈细胞诱导免疫应答的潜能。在缺乏其他APC成分的情况下，抗原特异的B细胞能诱导初始CD8+T细胞的应答；记忆性B细胞能作为APC通过CD40L-CD40依赖的方式激活初始CD4+T细胞。体外试验中发现，CD40活化的人B细胞可以很好地诱导抗原特异的CD4+T细胞和CD8+T细胞，实际上，CD40活化的人B细胞可以表达共刺激分子配体、MHC I类和II分子，并具备向次级淋巴器官迁移的能力，这些结果提示B细胞在体内足以诱导初始CD8+T细胞的应答。更为重要的是，从外周血细胞中可以大量扩增这种B细胞，使得其在疫苗领域的应用极具前景。抗原提呈细胞的活化状态决定了T细胞免疫应答的质量和效率。静息APC导致T细胞免疫耐受和无能，而充分活化的APC则自主地触发高效的T细胞应答。鉴于TLR9结构性地表达在B细胞表面，采用TLR9激动剂CpG ODN活化B细胞研究其APC的潜能已成为该领域的热点。CpG ODN可以有效地诱导抗原刺激的初始B细胞增殖并延长其存活时间，并促进B细胞共刺激分子CD80、CD86及MHCⅠ、Ⅱ类分子的表达,提示CpG具有增强初始B细胞抗原提呈的能力。进一步实验显示，CpG ODN活化的初始B细胞能增强向自体CD8+T细胞交叉提呈巨细胞病毒抗原，并诱导CMV特异性CD8+T细胞增殖，显示出初始B细胞作为APC的潜能。鉴于目前关于CpG ODN在B细胞提呈HBV抗原中的作用尚未见相关的报道，本研究主要观察CpG ODN对人初始B细胞提呈HBV表位功能的影响。本研究分为两部分。首先，我们选取三种类型中具有代表性的ODN：CpG-2006、CpG-2216和CpG-2395，并根据我国HLA分型特点以及T细胞表位的亲和力，选取四种不同的HLA-A2限制性HBV表位进行试验；并根据前一部分结果，选取CpG-2216进行后续试验，观察了阻断共抑制分子PD-1/PD-L1通路对CpG-2216在B细胞提呈HBV抗原中作用的影响。第一部分：CpG ODN预处理对人初始B细胞向CD8+T细胞提呈HBV表位的影响首先将CpG ODN与经磁珠分选获得的人初始B细胞共孵育48小时，再与HBV表位共孵育12h后进行荧光显微镜及流式细胞仪检测。结果显示，CpG不同程度地增强初始B细胞与HBV表位的结合（p<0.01），其中初始B细胞结合表位HBx115-123增强最显著。随后，我们检测了CpG ODN活化的初始B细胞与表位结合后的共刺激分子CD80、CD86、MHC I和MHC II分子的表达情况。结果显示，CpG ODN不同程度地上调了上述共刺激分子和MHC分子的表达，提示CpG ODN活化的初始B细胞具有APC潜能。通过将与表位结合的CpG ODN活化后的初始B细胞与自体CD8+T细胞共培养，我们发现：CD8+T细胞分泌IFN-γ和颗粒酶B的水平不同程度地上调，其中与表位HBx115-123结合的CpG-2216活化的初始B细胞诱导的上调最显著。实验结果提示：CpG ODN可差异性地增强初始B细胞向自体CD8+T细胞提呈HBV表位的能力。第二部分：阻断人初始B细胞PD-1/PD-L1通路对CpG0DN增强其抗原递呈功能的影响我们采用单克隆抗体阻断初始B细胞PD-1/PD-L1通路之后向自体CD8+T细胞提呈HBV表位HBx115-123，并检测了HBx115-123特异性CTLs的数量及CD8+T细胞的IFN-γ表达。结果显示：采用PD-L1的阻断性抗体阻断PD-1/PD-L1通路，能使表位特异性CTL数量显著增加，并使CD8+T细胞分泌IFN-γ的水平显著增高。同时采取CpG-2216活化及阻断PD-1/PD-L1通路，与单独应用二者之一比较，初始B细胞诱导上述效应的能力显著提高（p<0.01）。综上所述，本研究结果提示：CpG ODN能差异性地提高人初始B细胞对HBV表位的抗原提呈功能，并能有效增强其诱导的自体CD8+T细胞的细胞毒作用；联合阻断人初始B细胞PD-1/PD-L1通路，对CpG ODN增强初始B细胞的抗原提呈功能具有协同效应。本研究为通过人初始B细胞调节机体对HBV的免疫应答提供了新的线索和思路。