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目的:青天葵为兰科植物毛唇芋兰Nervilia fordii(Hance)Schltr.的干燥全草或块茎,具有显著的清热解毒作用,实验研究证明青天葵总多糖具有抗补体免疫活性。青天葵多糖的成分复杂,其分子量、糖链长度、单糖的组成和连接方式均会影响其药理作用。因此,本论文对青天葵多糖的提取、分离纯化、理化性质组成和结构进行系统研究,并对所获得的青天葵均一多糖进行抗补体免疫活性研究,为进一步阐明青天葵发挥“清热解毒”功效的物质基础提供理论依据。方法:1.采用水提醇沉法提取青天葵多糖粗品,Sevage法结合木瓜蛋白酶除去游离蛋白质后用DEAE-纤维素柱层析和Sephdex G-100凝胶柱层析进行分离纯化;采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)法进行分子量测定和纯度鉴定;采用PMP柱前衍生高效液相色谱法进行单糖组成分析;苯酚-硫酸测定总糖含量;Folin-酚法测定蛋白质含量;硫酸-咔唑法测定糖醛酸含量;采用紫外光谱(UV)、红外光谱(IR)、一维核磁共振波谱(1D-NMR)、二维核磁共振波谱(2D-NMR)、甲基化-气质联用等方法进行结构分析。2.采用体外细胞溶血免疫分子模型,以肝素钠注射液为阳性对照,测定均一多糖在补体经典激活途径和旁路激活途径中的抗补体活性,确定青天葵多糖的抗补体免疫活性。3.采用MTT法测定均一多糖DT2-1和DT2-2对RAW264.7小鼠巨噬细胞增殖活性的影响,采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞产生一氧化氮(NO),构建体外细胞抗炎模型,并用青天葵多糖DT2-1和DT2-2进行干预。结果:1.从青天葵总多糖中分离得到5种均一多糖,分别为DT2-1、DT2-2、DT4-2、DT4-2 及 DT6-1,其分子量分别为 1280、950、1070、810、930KDa,总糖含量分别为78.64%、82.45%、86.13%、83.51、84.72%,蛋白质含量分别为 3.95%、6.38%、5.63%、4.65%、5.44%,糖醛酸含量分别为 8.44%、16.65%、4.01%、2.42、7.17%,其中 DT2-1 中主要含有半乳糖(Gal)、阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man),三者的比例为3.4:1.4:1,含有少量的葡萄糖(Glc)、木糖(Xyl)、鼠李糖(Rha)、葡萄糖醛酸(GlcA)、半乳糖醛酸(GalA);DT2-2中主要含有Gal(半乳糖)、Ara(阿拉伯糖)、鼠李糖(Rha),三者的比例为2.1:2:1,含有少量的甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)、葡萄糖醛酸(GlcA)、半乳糖醛酸(GalA);DT4-1中主要由葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)及阿拉伯糖(Ara)组成,三者的比例为2:1.6:1,含有少量的鼠李糖(Rha)、甘露糖(Man)、葡萄糖醛酸(GlcA);DT4-2.与DT6-1均主要由葡萄糖(Glc)及半乳糖(Gal)组成,比例分别为6.4:1和3:1,含有少量的鼠李糖(Rha)、甘露糖(Man)、葡萄糖醛酸(GlcA)。2.青天葵均一多糖DT2-1和DT2-2在补体经典激活途径和旁路途经中均无显著地抗补体活性;DT4-1、DT4-2及DT6-1具有显著地抗补体免疫活性,经典途径的CH5o分别为54.21±2.62、77.54±2.12及51.46±2.38μg/ml,旁路途径的 AP5o分别为 76.68±5.14、92.58±6.42 及 91.35±6.42μg/ml,它们的活性稍弱于阳性对照药肝素钠。3.五个均一多糖均无细胞毒性,且可以显著提高RAW264.7小鼠巨噬细胞的增殖率;DT2-2、DT4-1、DT4-2和DT6-2在浓度10～300 μg/ml时均可以显著抑制脂多糖(LPS)诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞分泌一氧化氮(NO),而DT2-1则无明显抑制作用。结论:从活性青天葵总多糖部位追踪得到5个均一多糖。通过体外溶血抗补体模型和LPS诱导RAW264.7小鼠巨噬细胞释放NO炎症模型,进一步证实青天葵多糖具有抗补体免疫活性,提示多糖类成分可能是青天葵发挥清热解毒功效的活性成分。