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宫颈癌是威胁全球女性健康常见的疾病之一,也是极少数病因明确的恶性肿瘤,目前已经明确高危型HPV病毒持续感染是宫颈癌前病变及宫颈癌发生发展的必要因素。一般地,一年内80%感染了 HPV的妇女会自我清除病毒,仅有小部分女性无法清除呈持续性感染甚至发生宫颈病变。目前对机体清除HPV持续性感染的机制并不清楚。阴道微生态主要由阴道的解剖结构、阴道菌群和阴道局部内分泌调节系统组成。其中,阴道菌群作为生物屏障,在阴道酸性环境的维持、免疫功能的激活上发挥着重要作用。而随着宏基因组学、蛋白质组学、代谢组学等的飞速发展,与女性生殖道健康密不可分的阴道菌群的研究也在不断深入。健康的亚洲女性阴道菌群组成以乳酸杆菌为主,在性激素(雌激素、孕激素等)的参与下共同维持生殖道的动态平衡。当该体系一旦失衡,就会导致机体遭受病原体(霉菌、滴虫、支原体、衣原体、淋病奈瑟菌、HPV、HIV等)感染的机会增加,从而发生宫颈疾病的风险也提高,但至今对阴道菌群与HPV感染的关系目前尚不十分清楚。本研究第一步是对阴道分泌物标本进行16S rRNA基因测序分析。在此基础上,再对乳酸杆菌的细胞壁成分肽聚糖作用后对人上皮细胞(HaCat)HPV主要的膜受体HSPG表达和HPV假病毒颗粒感染细胞的变化情况进行观察。旨在分析阴道菌群及其代谢物质对HPV感染人上皮细胞的影响,为探索预防HPV感染及宫颈癌发生的新途径提供证据。第一部分hr-HPV感染与否与阴道菌群群落组成和多样性的分析目的探索阴道菌群组成和多样性与hr-HPV感染是否存在关系。材料与方法在浙江大学医学院附属妇产科医院的阴道镜室按照拟定的纳排标准收取HPV阴性、HPV阳性妇女的阴道分泌物标本,提取分泌物标本的DNA后选取66例满足建库条件的标本DNA作测序分析。根据相应的测序结果进行分析阴道菌群与hr-HPV感染之间的关系。结果1.通过16S rRNA基因测序,发现乳酸杆菌在HPV阴性和HPV阳性的分组中占据了较大的比重,为优势菌属。在属水平,两组间无显著性差异。2.HPV阳性组的阴道菌群多样性有所降低。结论1.与HPV阴性妇女相比,HPV阳性妇女阴道菌群的多样性在属水平降低。2.在HPV阳性状态下,厚壁菌门、乳杆菌纲等的比例升高。第二部分阴道卷曲乳酸杆菌细胞壁成分肽聚糖对HPV感染人上皮细胞的影响目的确定乳酸杆菌代谢产物肽聚糖(PGN)对HPV感染上皮细胞的影响。材料与方法选取感兴趣的菌株(L.crispatus,卷曲乳酸杆菌),锚定其相关的代谢产物肽聚糖(PGN),提取验证该物质后,将肽聚糖作用于人上皮细胞(HaCat)24h后,构建PGN-HaCat细胞感染HPV假病毒颗粒(PsV)的细胞模型,RT-PCR测定肽聚糖作用后的HaCat细胞膜上HPV主要受体HSPG2的表达情况,流式检测带有GFP荧光标记的PsV进入HaCat细胞的感染率。结果1.PGN作用于HaCat细胞后,HSPG2表达水平较阴性组下降。2.PGN作用后,HaCat细胞的PsV感染率较阴性组下降。结论1.一定浓度的肽聚糖可抑制HPV相关的主要细胞膜受体HSPG2的表达。2.一定浓度的肽聚糖作用细胞后降低上皮细胞的HPV感染率。