论文部分内容阅读
研究背景：急性肾功能损伤是肝移植术后常见的并发症,有很多因素引起肾功能损伤,但小体积肝移植中引起的门静脉高压是否加剧肾功能损伤以及是否影响肾内血管阻力,目前仍不清楚；七氟醚是临床上广泛应用的麻醉药,在动物实验和细胞培养中发现七氟醚对肾脏有保护作用,但七氟醚对小体积肝移植术后肾功能的影响尚无研究。本实验通过建立大鼠肝移植模型,研究不同供肝体积对再灌注早期门静脉压力的影响,门静脉高压对肾功能和肾内血管阻力的影响以及七氟醚麻醉对大鼠小体积肝移植术后肾功能的影响和相关机理。材料与方法：Ⅰ.不同供肝体积的大鼠肝移植的早期肾功能损伤将大鼠随机分为3组,假手术组(不进行肝移植,其他操作相同)6只,50%供肝体积肝移植组(50%肝移植组,50% LT group)和全肝肝移植组(对照组,100%LTgroup)各18对大鼠,6只测定门静脉压力和平均压；再灌注后30min,2h抽腹主动脉血,其中2ml用于检查谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST)和肌酐(sCr)。另外3ml高速离心后保存血清,用ELISA法监测TNFα, IL-6, NGAL,半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys)。每一时间点取血动物为6只(n=6),同时断头处死,取肾组织,蛋白裂解后测MPO, MDA;另制作肾组织切片,观察肾脏组织的损伤情况。Ⅱ.肝移植过程中肾内动脉阻力指数的变化将大鼠随机分为4组,假手术组(不进行肝移植,其他操作相同)6只；无肝期组(只测定门静脉、下腔静脉阻断10min,15min的右肾内动脉血流流速及动脉阻力指数)6只；50%供肝体积肝移植组(50% LT group)和全肝肝移植组(100% LT group)各6对大鼠,观察新肝早期的右肾内动脉血流流速及动脉阻力指数。Ⅲ.大鼠小体积肝移植中七氟醚麻醉对肾功能的保护作用及机理的研究将大鼠随机分为2组,七氟醚麻醉下行50%供肝体积肝移植组(SEV-group)和水合氯醛麻醉下行50%供肝体积肝移植组(CH-group)各30对大鼠,受体术后检测方法：每组12只观察7天生存率；每组6只血液动力学检查,左颈动脉插管行动脉血压监测。无肝期结束前清空膀胱的尿液,再留取再灌注后2小时的尿液,作尿氟离子浓度检测。在再灌注后2小时,24小时抽腹主动脉血,其中2ml用于检查ALT, AST, sCr。另外3ml高速离心后保存血清,用ELISA法监测’TNFα, IL-6, NGAL。每一时间点取血动物为6只(n=6),取血后断头处死,立刻取肾组织。用Westerblot测NF-kB蛋白表达。取肾组织蛋白裂解后测MPO活性；另制作肾组织切片,观察肾组织的损伤情况。用连续双抑制性离子色谱仪测血浆和尿液氟离子浓度。结果：1. 50%供肝移植组再灌注50min内的门静脉压力要显著高于全肝移植组(P<0.05)。再灌注30min.2h,两组受体的ALT,AST无明显区别。再灌注30min全肝组的sCr明显比50%供肝组的低(P<0.05)；再灌注30min,2h,50%供肝组Cys, NGAL明显比全肝组高(P<0.05)。再灌注30min,50%供肝组血浆TNFα和IL-6的水平明显增高(P<0.05)；再灌注30min,2h,50%供肝组的肾组织MPO, MDA活性明显高于全肝组(P<0.05)。再灌注2h,50%供肝组的肾脏上皮坏死(4.2±1.2)比全肝组明显(1.7±0.9；p<0.05)。2.无肝期10min,15min两组的右肾小叶动脉阻力指数比基础值明显升高(P<0.05)；再灌注5 min,10 min.15min,20min两组的右肾小叶动脉阻力指数明显低于基础值(P<0.05)；再灌注5 min,10 min,15min全肝组的右肾小叶动脉阻力指数明显高于50%供肝组(P<0.05)；再灌注20min,30min两组之间无明显区别(P>0.05)。再灌注30min的Cys与RI相关性不明显(r=0.45 P=0.06)；再灌注30min的TNFα与RI密切相关(r=0.67 P=0.02)。3.水合氯醛麻醉组比七氟醚麻醉组大鼠的7天存活率低(P<0.05)。再灌注2小时,两组受体的ALT,AST无明显区别(P>0.05)。再灌注24小时七氟醚麻醉组的sCr明显比水合氯醛组的低(P<0.05)；再灌注2小时两组的sCr无明显区别(P>0.05)。再灌注2小时,七氟醚麻醉组的NGAL水平明显比水合氯醛组低(P<0.05)。七氟醚麻醉组的血浆TNFα和IL-6的水平明显低(P<0.05)；再灌注24小时,七氟醚麻醉组的血浆TNFα明显比水合氯醛组的低(P<0.05)。再灌注2小时七氟醚麻醉组的肾组织MPO的活性明显低于水合氯醛组(P<0.05)。再灌注2小时,水合氯醛麻醉组的肾组织NF-kB蛋白表达比七氟醚麻醉组增加(P<0.05)。水合氯醛麻醉组的肾组织上皮坏死(3.2±0.8)比七氟醚麻醉组明显(1.5±1.1；p<0.05)。七氟醚麻醉组再灌注2h的血浆和尿氟离子浓度增高(P<0.05)。结论：1. 50%供肝移植组再灌注早期门静脉压明显增高,术后早期的肾功能损伤比较明显。小体积肝移植组再灌注早期全身炎性反应和肾组织的炎症反应较明显。2. 50%供肝移植组无肝期右肾内动脉RI明显增高,再灌注早期RI降低,明显低于基础值,50%供肝移植组的RI明显低于全肝移植组。50%供肝移植组的RI降低可能与门静脉压增高,TNFα释放增多有关。再灌注早期的RI降低并不能改善肾功能。3.七氟醚麻醉能提高大鼠小体积肝移植术后生存率,通过降低全身和肾脏局部的炎症反应,减轻早期肾功能损伤。七氟醚麻醉能提高再灌注早期血浆和尿中氟离子浓度,但在大鼠小体积肝移植模型中,通过检测肾小管损伤指标(NGAL)发现七氟醚对肾功能的作用是安全的。