研究背景和目的2011年调查显示全国恶性肿瘤发病率和死亡率中肺癌排首位,其肺癌发病率在男性肿瘤中排第一位,女性排第二位。恶性死亡率中肺癌排首位,男女性肺癌死亡率均排第一位。目前治疗肺癌方法有手术治疗、化疗、放疗等,晚期肺癌的治疗仍然是个难点,晚期肺癌全身情况差,不及时治疗,生存率较低。早期诊断对肺癌治疗,延长生命,提高生活质量意义重大,因此寻找一种诊断、治疗肺癌的新方法是目前研究的新热点。分子靶向药物可以与肿瘤细胞对应的靶点相结合,抑制肿瘤细胞的生长与增殖,近年来成为治疗肿瘤的一个重要新方法。神经鞭毛蛋白-2（NRP-2,neuropilin-2）作为血管内皮生长因子（VEGF）-3的共受体,对淋巴管及血管的生成具有重要作用。最近研究显示NRP-2过表达在多种人类癌细胞中,并与肿瘤的恶性程度和预后密切相关,被认为是一个很有前景肿瘤显像和治疗靶点。本研究我们利用前期探索的杂交瘤技术产生NRP-2单克隆抗体。利用放射性核素标记NRP-2单克隆抗体,形成针对于NRP-2受体新的分子探针。探讨肺癌细胞表达NRP-2情况,新探针¹³¹I-anti-NRP-2 mAb在肺癌移植瘤裸鼠的体内分布及显像,同时对探针¹³¹I-anti-NRP-2mAb对肺癌移植瘤裸鼠的治疗作用进行初步的探讨。实验方法（1）在体外扩大培养杂交瘤细胞并接种至Balb/c小鼠腹腔产生靶向NRP-2 b1b2区域的NRP-2单克隆抗体的腹水。腹水经过一系列的洗脱、透析、冻干的步骤,获得纯化后的抗NRP-2抗体。纯化后的NRP-2抗体经SDS-PAGE实验和间接ELISA实验,检测抗体的纯度及活性;（2）PCR实验和Westemblotting实验检测16HBE（支气管上皮细胞）、A549、H1299肺癌细胞中mRNA及蛋白表达水平。从两株非小细胞肺癌中选择NRP-2表达量高的细胞株,继续实验。流式细胞术、免疫荧光实验观察NRP-2 mAb与肺癌细胞上NRP-2受体结合能力;HE染色观察肺癌组织的形态学,免疫组织化学染色实验检测肺癌组织上表达NRP-2的情况。（3）氯胺T实验法标记¹³¹I-anti-NRP-2 mAb探针,细胞结合实验检测该探针与细胞中NRP-2结合情况;肺癌移植瘤裸鼠生物体内分布实验检测探针在体内各器官及组织的摄取情况;SPECT显像实验观察探针在肺癌移植瘤裸鼠的显像效果。（4）肺癌移植瘤裸鼠进行探针¹³¹I-anti-NRP-2 mAb治疗实验观察¹³¹I-anti-NRP-2 mAb对肿瘤的生长抑制作用。实验结果（1）通过杂交瘤技术获得了大量的NRP-2单克隆抗体。经SDS-PAGE实验及间接ELISA实验鉴定抗体的纯度大于95%,活性为1×10-6。（2）PCR和westernblotting实验显示A549肺癌细胞中NRP-2的mRNA和蛋白表达量较高。流式细胞术结果显示A549肺癌细胞可以与NRP-2 mAb结合。免疫荧光实验结果显示抗体定位在细胞表面。免疫组化实验结果显示抗体能够特异性的定位在肺癌组织上。（3）氯胺T标记NRP-2 mAb的标记率为（94.69±3.63）%,放化纯（98.56±0.48）%,室温下PBS中放置至72 h,其标记率仍>85%。细胞摄取实验显示在180min 时摄取最高为（6.60±0.36）%,IC50=（96.6± 1.44nM）。体内生物分布实验结果示¹³¹I-anti-NRP-2 mAb具有很好的滞留性。SPECT显像显示在48h肺癌移植瘤显像最清楚。（4）¹³¹I-anti-NRP-2mAb对肺癌移植瘤治疗效果明显,有生长抑制的作用。结论（1）通过杂交瘤技术制备了大量纯度及活性较高NRP-2单克隆抗体。（2）肺癌细胞上表达NRP-2蛋白,NRP-2mAb能与肺癌细胞、肺癌组织中NRP-2蛋白特异性结合。（3）氯胺T标记法成功标记¹³¹I-anti-NRP-2mAb,方法简单,标记率高,稳定性好,可以与肺癌细胞及肺癌移植瘤特异性结合。（4）¹³¹I-anti-NRP-2 mAb可以抑制肺癌移植瘤生长。