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玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是镰刀菌属产生的类雌激素毒素,可对人体及家禽造成生殖毒性、遗传毒性、免疫毒性等多种毒性,在农作物的生长、收获、加工、运输及储存过程中都可能受其污染,可在全世界范围内对人体健康造成威胁。针对此现状,本研究从生物脱毒法着手对ZEN的脱毒降解进行研究,现有资料表明,嗜酸乳杆菌是乳酸菌中被广泛研究的益生菌之一,其在肠道中较强的黏附能力和较高的耐酸耐胆盐能力,具有调节胃肠道菌群环境、提高机体免疫力、抑制致病菌等多重益生特性,在乳品、饮料、饲料等食品领域中均得到了开发应用,在医学研究应用中也有所贡献,基于此,本实验选定嗜酸乳杆菌通过基因克隆手段使其获得生物法降解ZEN的能力。本论文以实验室已有的质粒p PIC9K-Oxa为模板,设计引物P1、P2,扩增从不动杆菌SM04分离的ZEN降解酶Oxa基因插入乳杆菌穿梭载体p MG36e中,化学法转入E.coli JM109构建重组质粒p MG36e-Oxa,再将重组质粒克隆到嗜酸乳杆菌ATCC4356中,通过重组菌的培养表达获得重组蛋白,经SDS-PAGE电泳和ZEN降解实验对重组蛋白Oxa的表达和降解活性进行了验证,表明培养重组嗜酸乳杆菌可大量表达ZEN降解酶Oxa,重组蛋白Oxa在37°C条件下与ZEN反应12h后其降解率为42.95%。本实验进一步对重组嗜酸乳杆菌的多种益生特性与非重组菌进行了比较,所得结论如下:(1)插入ZEN降解酶Oxa基因的嗜酸乳杆菌在含0.3%胆盐的MRS培养基中培养6h后其对数存活率达90.35%,比非重组菌(94.28%)的胆盐耐受力稍减弱;(2)重组菌在p H为2.0的模拟人工胃液中培养3 h后其对数存活率为89.99%,比非重组菌(95.79%)的耐酸特性下降;(3)在抑菌试验中,重组菌对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均起到了不同程度抑制作用,明显强于非重组菌的抑菌效果;(4)以成膜Caco-2细胞测定菌体的粘附能力,结果显示不同浓度的重组菌和非重组菌均保持了相当良好的粘附能力,具有在小肠粘膜上皮细胞定殖的潜力(p<0.05)。综上,重组嗜酸乳杆菌的生理和益生特性未受到外源基因的插入和表达的影响,仍保留了较好的胆盐耐受力、耐酸性和粘附性。