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水貂、狐狸和貉是重要的毛皮经济动物,近些年来,因具有较高的经济价值而被大量人工饲养。除作为裘皮加工业原材料外,去皮后产生的胴体,由于其价格低廉,时常被非法加工成畜禽产品,对食品安全造成了严重威胁。因此,建立毛皮动物组织的分子鉴别检测技术,对维护毛皮动物产业健康发展具有重要意义。本研究旨在利用Cytb基因从常见肉制品中鉴别貂狐貉组织,并进一步利用TYR和12S rRNA基因对不同品种的水貂进行区分,最后利用mtDNA中D-loop区的差异性对相同品种不同水貂个体进行鉴别。首先,本研究根据GenBank已发表的水貂、狐狸和貉的Cytb基因序列设计了3对特异引物,分别进行PCR扩增及酶切验证,并对各引物的特异性、灵敏度、以及交叉性进行分析。同时,优化退火温度并构建多重PCR,并对其特异性、灵敏度、稳定性进行试验验证。其次,选取水貂的TYR基因和mtDNA中的12S rRNA基因,对三种不同品种的水貂进行基因扩增、回收、测序,并将其结果进行比较分析。第三,选取水貂mtDNA的D-loop区全长设计引物,进行PCR扩增、回收、纯化、克隆、挑菌、测序,随后进行数据分析。结果显示:(1)所建立的多重PCR方法可以特异性扩增出貂292 bp、狐859 bp、貉561 bp的目的条带;灵敏度均能达到1.0 pg/μL。(2)利用水貂TYR和12S rRNA基因设计的引物对短毛黑、红眼白和铁灰三个不同品种进行PCR扩增;测序结果与参考序列比对发现,红眼白貂TYR基因在137位点的位置发生错义突变(TGT→TGA);铁灰水貂12S rRNA基因在883位点的位置发生错义突变(CTG→CTA);结合TYR和12S rRNA两个基因突变位点可以区分短毛黑貂、红眼白貂和铁灰水貂三个品种。(3)D-loop区扩增的全长为1184 bp,测序结果显示,A+T碱基含量为最高,符合脊椎动物的mtDNA的D-loop区碱基组成;其中,短毛黑貂个体差异在0.2%~9.5%,红眼白貂个体差异在0.1%~4.7%,铁灰水貂个体差异在1.1%~5.0%。以上结果表明:(1)成功建立了能够同时检测水貂、狐狸和貉组织的多重PCR方法,该方法灵敏度高、稳定性强;(2)利用TYR基因和12S rRNA基因区能区分出水貂的三个不同品种:黑色水貂、红眼白貂、铁灰水貂;(3)通过mtDNA中D-loop区能鉴别相同品种不同水貂个体之间的差异性。